反向模式强阳离子交换反向模式二维色谱法测定人血浆中甲氨蝶呤浓度.pdfVIP

第43 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究简报 第1 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015 年1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 146 ~150 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.140709 反向模式鄄强阳离子交换鄄反向模式二维色谱法测定 人血浆中甲氨蝶呤浓度 1,2 1,2 1,2 *1,2 盛阳昊 摇 刘丹琦 摇 王 萍 摇 周伯庭 1 2 (中南大学湘雅医院药学部,长沙410008)摇 摇 (中南大学药学院,长沙410013) 摘摇 要摇 建立了反向模式鄄强阳离子交换鄄反向模式(Reversed phase鄄strong cation exchange鄄reversed phase)二维 色谱平台测定人血浆中甲氨蝶呤浓度的方法。 样品经三氯醋酸沉淀蛋白后,在ASTON C 一级柱(100 mm 伊 8 4.6 mm,5 滋m)上完成初分离,通过六通阀切换,经ASTON SCX 中间级(20 mm伊4.6 mm,5 滋m)二次分离和 储存,在SACC 二级柱(100 mm 伊4.6 mm,5 滋m)上完成最后分离,并测定。 一级柱流动相为10 mmol/ L醋 8 酸铵鄄乙腈(90颐10,V/ V,以醋酸调至pH 3.8),流速为1.0 mL/ min;中间级流动相为10 mmol/ L H PO 溶液 3 4 (pH3.0);二级柱流动相为50 mmol/ L醋酸铵鄄乙腈(87颐13,V/ V,以醋酸调至pH5.2),流速为1.2 mL/ min, 检测波长306nm。 单次分析时间4 min,线性范围0.09~5.1滋mol/ L,检出限为0.005 滋mol/ L,日内RSD小于 1.8%,日间RSD小于3.5%,相对回收率99.1% ~101.25%,绝对回收率85.7% ~86.4%。 本方法简便、准 确,适合日常血药浓度监测和药代动力学研究。 关键词摇 二维色谱;甲氨蝶呤;高效液相色谱法 1摇 引摇 言 甲氨蝶呤(MTX)为二氢叶酸还原酶抑制剂,通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶,阻止二氢叶酸还原 为四氢叶酸,推迟和阻碍DNA 和RNA 的合成,发挥抗肿瘤作用,被广泛用于治疗急性淋巴细胞白血病 等恶性肿瘤疾病。 临床上采用大剂量甲氨蝶呤联合甲酰四氢叶酸钙( Calcium folinate,CF) 解救疗法治 疗儿童急性淋巴细胞性白血病,由于该疗法都是超常规大剂量静脉滴注,易产生严重的甚至致命的毒 性反应,例如肾衰竭﹑骨髓抑制、肝损害、胃肠道反应、皮肤黏膜反应等,且剂量与血药浓度个体差异 [1] [2] 大,必须开展MTX血药浓度检测 。 测定甲氨蝶呤的方法现主要有荧光偏振免疫法(FPIA) 和高效 液相法[3~8]。 荧光偏振免疫法需要进口免疫试剂盒,因价格高而限制了在临床使