次生物质对斜纹夜蛾药剂敏感性及其靶标酶与解毒酶活.pdfVIP

15.次生物质对斜纹夜蛾药剂敏感性及其靶标酶与解毒酶活 性的影响 程新胜 周 郑 王方晓 （中国科学技术大学烟草与健康研究中心 230051） 摘 要： 本文研究了烟碱、芸香苷两种次生物质对斜纹夜蛾中肠羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶、乙酰胆碱酯 酶活性的影响以及对攻蛾、锐劲特、菜喜三种低毒化学药剂的敏感性影响。结果表明这三种次生物质能够 不同程度的抑制羧酸酯酶活性，同时诱导谷胱甘肽转移酶和乙酰胆碱酯酶的活性。烟碱能够明显提高斜纹 夜蛾对三种药剂的敏感性，而芸香苷则随浓度升高降低斜纹夜蛾对药剂的敏感性。 关键词： 斜纹夜蛾 次生物质 药剂敏感性 靶标酶 解毒酶 植物在与植食性昆虫的协同进化过程中，为了应对虫害胁迫，渐渐形成了多种抗虫机制， 一些次生代谢产物就是植物应对虫害胁迫的化学武器（R）。这些次生产物通过驱避、拒食、 毒杀、抑制害虫营养代谢、吸引害虫天敌等多种方式来降低害虫对植物的危害，同时，次生 产物也可能影响到害虫对化学药剂的敏感性 （R）。斜纹夜蛾(Spodoptera litura Fabricius) 属鳞翅目夜蛾科,系多食暴发性害虫,危害植物达99 科200多种,近年来在我国暴发频率明显 增加,对烟草及其它农作物的为害日趋严重（R）。本实验主要研究了烟碱、芸香苷两种烟草 重要的次生物质对斜纹夜蛾药剂敏感性的影响，同时就两种次生产物对斜纹夜蛾的解毒酶与 靶标酶活性的影响也进行了研究，以期为进一步探讨斜纹夜蛾的综合防治提供依据。 1.材料与方法 1．1供试材料 供试斜纹夜蛾幼虫为本试验室在养虫室内用人工饲料继代饲养，培养条件：12：12（D： L）、28±1℃、65±5%（RH）。 供试药剂：菜喜2. 5%悬浮剂(有效成分:多杀菌素,美国陶氏益农公司)；锐劲特5%悬浮 剂(有效成分：氟虫腈，拜耳作物科学公司)；1000 万PIB/ mL 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 （安徽绩溪奥绿生物工程有限公司提供)。纯烟碱（AR）（Sigma公司）、芸香苷（BR）（国药 集团化学试剂有限公司生产）。 1．2 人工饲料的制作 取麦芽粉 275g、大豆粉 75g、琼脂 25g，加入 930ml水搅匀（可根据琼脂质量适量加减 水量），并将搅匀物放入高压锅在 0.12Mpa、122℃下高压消毒 30 分钟。另取山梨酸 2.0g、 酵母粉 20g、40%福尔马林 1ml、对羟基苯甲酸甲酯 4g、维生素 C7g、维生素 B53.2mg、肌醇 326.4ml、威氏盐 9.5ml、0.8%生物素水溶液 4ml 加入 70ml水配成混合物，将此混合物与先 前已消毒的搅匀物进行再搅匀，作为对照饲料。另制6 份相同饲料，分别依次加入烟碱、芸 香苷，各设 1%、0.5%、0.1%三个浓度（干重），制成 6种处理饲料。 1.3毒力测定方法 毒力测定采用点滴法：用蒸馏水将药剂稀释成5个浓度，选择大小一致的3龄幼虫，20 头试虫一组，每浓度三次重复。于试虫前胸背板点滴2μl药液,48小时后检查死亡率，以毛 笔轻触虫体、不产生反应者视为死亡。 所得数据用spss12统计分析软件进行新复极差分析。 1.4羧酸酯酶活性测定 3龄幼虫 5头,冰浴匀浆, 3000转/分离心 10min,冰浴待测。以α-NA为底物,经酯酶水 解后生成α-萘酚，与显色剂(5%SDS∶1%固蓝 B 盐=2∶5)作用呈现深蓝色,于 600nm 处测 OD 值。根据制作的标准曲线和酶源蛋白含量,将OD 值换算成比活力mM/mg.pr./30min。 1.5谷胱甘肽转移酶活性测定 3龄幼虫5头，冰浴匀浆，匀浆液于4℃下，10000 转/分离心60min。以CDNB（1-氯-2， 4-二硝基苯）为底物， 27℃下于 751 分光光度计 340nm 处，测定 5min 内 OD 变化值，比活 力单位为OD/mg pr./min。 1.6乙酰胆碱酯酶活性测定 3 龄幼虫 5 头,冰浴匀浆,匀浆液 4℃、3000 转/分离心 10min,取上清液作为酶源，冰浴 待测。以碘化硫代乙酰胆碱作底物, DTNB 为显色剂，27℃恒温振荡水浴反应 15min,毒扁豆 碱终止反应, 412nm 处测其 OD值，并计算 AChE比活力 OD·(mg·15min)-1 。 蛋