DJ-1低表达对心肌细胞缺氧预适应延迟保护影响研究.pdfVIP

摘要 摘要 目的：构建靶向DJ．1的RNAi真核表达载体，观察DJ．1低表达对心肌细胞 缺氧预适应(APC)延迟保护的影响，以求反向阐明DJ．1是否作为内源性保护 蛋白通过其抗氧化应激作用参与心肌细胞APC延迟保护。 方法：1、设计靶向DJ．1基因的3条候选IⅢA干扰序列，利用真核表达载 Westem 后续细胞实验； 2、H9c2心肌样细胞随机分为5组：①正常对照(Con仃01)组； WestemBlot检测DJ．1删[矾A及蛋白表达；MTT法检测细胞存活率：按试剂盒 说明测定各组细胞内LDH的活性，比色法测定细胞内MDA含量以及抗氧化物 分析DJ．1基因沉默前后APC对上述指标影响的变化。 结果：1、经酶切及DNA测序鉴定证实成功构建了各重组I斟A干扰真核表 Blot检测结果显 及阴性对照pGPU6／GFP／Neo．sh．NC。此外，RT．PCR和Westem H9c2细胞中DJ．1训刚A和蛋白表达的抑制率均在75％以上； 2、H9c2细胞经AR处理后，细胞存活率明显下降、LDH活性增