Cr（Ⅵ）在细胞p53封闭条件下线粒体损伤效应.pdf

Cr(VI)在细胞p53封闭条件下的线粒体损伤效应 摘要 目的：在体外试验系统，研究Cr(VI)在p53封闭条件下对L．02肝细 胞线粒体的损害效应，为进一步探讨Cr(VI)诱导细胞凋亡的独立线粒 体依赖性途径奠定实验基础。 方法：以L．02肝细胞为受试细胞，通过MTT试验分别检钡Up53抑 并检测细胞核内p53蛋白表达验证PFT-a对p53的抑制作用，筛选出有 组(第6组)。化学比色法检测细胞氧化损伤；荧光分光光度法检测线 粒体通透性转运孔(PTP)、跨膜电位(Arm)的变化；westernblotting 检测细胞色素C(Cyt 检、狈UBcl．2及Bax的基因表达水平；DNAladder检测细胞凋亡。 结果： 1．20}tmol／L PFT-a预处理细胞后可以明显抑制细胞核1勾p53蛋白 表达水平。 含量减少，MDA生成增多，与对照组比较差异有显著性(PO．05)； 加入NAC后有明显保护作用。 NAC后有相应的拮抗作用。 4．细胞凋亡相关调控因子释放：与对照组相比cr(V1)染毒组、 C和AIF蛋白增加，加入NAC后均出现明显减少(Po．05)。 5．Bcl．2及Bax基因表达水平改变：与对照组相比Cr(Ⅵ)染毒组、 Bax基因表达减少，加入NAC后均出现相应基因表达的增多。 6． 细胞核DNA损伤： 解现象，加入NAC后未见明显保护作用。 C“Ⅵ)能明显引起L．02肝细胞 结论：p53封闭条件下，20I_tmol／L 氧化应激，导致线粒体膜损伤、cytC与凋亡诱导因子(AIF)释放与 线粒体而诱导凋亡。 关键词： 六价铬，L．02肝细胞，线粒体损伤，PFT-et II Mitochondrialinducedhexavalentchromium damage by the of closedinL··02 undercondition p53 hepatocytes ABSTRACT themitochondriainduced objective：Toexplore damage by the of closedinL一02 hexavalent condition chromium(Cr(VI)underp53 tofurther the of induced hepatocytes，andinvestigatepathwayapoptosis mitochondriainL-02 treatedwith independentlyby damage hepatocytes Cr(VI)． Methods：L-02 were MTTtestwas cultured，and hepatocytes the L一02 treatedwithPFT-aalone totest of adopted viability hepatocytes and／orwith detectationof 3 levelinnucleiofL-02