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首届全国新型给药技术与中药现代化学术研讨会 北京 ·清华 ·2002 人工虫草与野生虫草的成分比较 李祥 邱蓉丽 陈形 (南京中医药大学，210029) 冬虫夏草为麦角菌科(Claviciaceae)真菌冬虫夏草Cordycepssinensis(Berk)Sacc.寄生在 鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体(寄生为鳞翅目、鞘翅目等昆虫幼体， 冬季菌丝浸入蛰居于土中的幼虫体内，吸取虫体养分，使虫体充满菌丝而亡，形成菌核，至 夏季虫草菌发育，从寄生尸体头部长出它的繁殖器官，露出体外，即称冬虫夏草)。同属植 物蛹草及亚香棒虫草的子实体及虫体亦可作为虫草入药。我国古代人民很早对其药用价值既 有一定的认识，如1757年 本《草丛新》记载:“平保肺，益肾补精艘，止血化痰，已劳嗽， 治隔症皆良”川。由于冬虫夏草的生产受地理气候条件的限制，野生资源奇缺。为了开发新 药源，我国开始应用生物技术发酵工程培养人工虫草1[21。冬虫夏草的活性成分为虫草素、 虫草酸和虫草多糖等，有抗肿瘤、抗病毒作用。本文对人工与野生冬虫夏草的有效成分虫草 酸和虫草多糖的含量进行了测定，并比较人工虫草与野生虫草的HPLC指纹图谱。 一、人工虫草与野生虫草的HPLC图谱比较 卜色谱条件，1 仪器:Waters515液相色谱仪;流动相:甲醇一磷酸盐缓冲液((pH=6.5)13:7:色谱柱: KromasicCje(250x4.6mm,5Wl);检测器:Waters2487紫外检测器:检测波长:260nm;流速: 0.8ml/min;灵敏度:2.OAUFS;柱温:30C. 2.实验方法与结果 按药典[3〕方法配制标准品及样品溶液，取冬虫夏草粉末(过三号筛)，精密称定0.5g,置 具塞锥形瓶中，精密加90%甲醇 IOMI,密塞，摇匀，称定重量，加热回流30分钟，放冷， 再称定重量，加90%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得样品溶液。取腺 普、虫草素对照品适量，加90%甲醇制成每lml含20gg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。 分别精密吸取对照品溶液及样品溶液各10川，注入液相色谱仪，进行测定，结果见图1,2, 3.由图谱可知，人工虫草有24个峰，比野生虫草多5个峰。人工虫草在15.9及21.9有两 个较大的峰出现，野生虫草未出现此两峰。人工虫草中腺昔保留时间为 12.532min，人工虫 草峰面积比野生虫草多25.26%，人工虫草及野生虫草均可见虫草素的峰。 二、 虫草酸的含量测定 .仪器与试药 仪器:752紫外光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司SZ080611249). 试药:野生冬虫夏草(由中药化学实验室提供，经陈建伟教授鉴定为麦角菌科 首届全国新型给药技术与中药现代化学术研讨会 北京 ·清华-2002 (Claviciaceae)真菌冬虫夏草Cordycepssinensis(Berk)Sacc.，人工冬虫夏教由东台市菇神食用 菌研究所提供)。 对照品:虫草酸(自制，提取方法见李祥博士论文102页41「):白色柱状结晶，mp165-166 ℃;经UV,IR,MS,1H-NMR.C-NMR,APT.1H-HCOSY.HMQC.HMBC鉴定。 高碘酸钠(北京化工厂，AR批号:001225),醋酸按(南京化学试剂厂，AR批号:930501), L-鼠李糖(上海化学试剂采购供应站试剂厂，批号:96041)，乙酞丙酮(上海试剂一厂，批号: 890606)冰醋醚南京化学试剂厂，AR批号:870302). Nash试剂的配制:取150g醋酸按加2ml冰醋酸和2m1乙酞丙酮，用蒸馏水稀释至 l000m1,混匀，即得。 高碘酸钠溶液的配制:取高碘酸钠配制成0.015mol/L的盐酸溶液中，混匀，即得。 2.实验方法 2.1对照品溶液的配制精密称取标准品吞一虫草酸25mg于25ml容量瓶中，用蒸馏水定容， 然后用蒸馏水稀释成所需浓度。 2.2样品液的配制分别取野生虫草及人工虫草各约0.5g,精密称定，分别加入20ml蒸馏水， 加热回流提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并滤液，于50m1容量瓶中定容， 再分别取2ml于100m1容量瓶中定容，得野生虫草样品液及人工虫草样品液。