苦地胆内酯对嗜水气单胞菌感染斑马鱼的保护效果及机理初探.pdfVIP

苦地胆内酯对嗜水气单胞菌 感染斑马鱼的保护效果及其机理初探 摘要 scaber Linn．)是一种分布广泛、来源丰富的民间常用 苦地胆(Elephantopus scaberlactones，ESL)作为苦地胆的重要活性成分， 传统中草药。苦地胆内酯(E 对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、巴氏杆菌、蜡状芽孢杆菌等 具有明显的体外抗菌作用；对供试细菌的体外抗菌作用机理主要是在细菌的对数 生长期，破坏细菌细胞壁，改变细胞膜通透性，导致细胞组分丧失、蛋白质变性， 释放出溶菌酶引起细菌自溶。然而，ESL是否对动物特别是水生动物的重要病原 菌—嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，AH)具有体内抗感染效果，其抗感 染机理如何，尚未见报道。本研究采集苦地胆，利用超声波辅助提取、加压硅胶 rerio)，进行ESL体内 柱层析等技术制备ESL，利用模式实验动物斑马鱼(Danio 舢菌感染保护效果试验，并初步探索ESL体内抗感染的机理，以补充ESL体内 抗感染研究的内容，为ESL成为中草药来源的抗菌饲料添加剂奠定理论与试验基 础。主要研究结果如下： 1．采用超声波辅助提取、加压硅胶柱层析等技术能够制备到苦地胆种内酯、 异苦地胆种内酯和去氧苦地胆内酯，以石油醚：氯仿：乙醚(3：5：2)为展开 剂，薄层层析法(thin layer 0．316和0．161。 12．5mg／ml,．15．6mg／ml。 3．饲料中添加一定剂量的ESL能对All菌感染斑马鱼形成保护作用，高剂量 恩诺沙星的保护效果相当。 4．投喂ESL含量为0．8％和1．6％的饲料，能使斑马鱼在AH菌致病性胞外产物 溶液中存活时间显著高于对照组，说明高剂量的ESL能增强斑马鱼抗AH菌致病 性胞外产物的能力。 5．饲料中添加不同剂量的ESL对斑马鱼的头肾指数及脾脏指数没有影响。 6．饲料中添加0．8％和1．6％的ESL能够显著提高斑马鱼体表黏液、肝脏及鳃 中溶菌酶的活性；添加0．4％的ESL能显著提高斑马鱼体表黏液中溶菌酶的活性。 7．饲料中添加0．8％、1．6％的ESL能够显著提高斑马鱼肝脏碱性磷酸酶活性。 8．饲料中添力1：11．6％的ESLfl邑够显著提高斑马鱼鳃总超氧化物歧化酶活性。 9．饲料中添加O．8％的ESL能够显著提高斑马鱼鳃组织中IgM含量。 10．ESL能有效防控AH菌对斑马鱼感染的可能机理是：通过直接抑菌杀菌 作用减少AH菌的数量；通过增强斑马鱼抗AH菌致病性胞外产物的能力降低其对 斑马鱼机体的危害；通过提高斑马鱼体内水解酶类如溶茵酶、碱性磷酸酶活性来 杀死俏菌；通过提高斑马鱼超氧化物歧化酶活性，以清除已完成杀伤病原功能 的吞噬细胞内超氧化物自由基；通过提高斑马鱼组织中IgM含量，增强机体的体 液免疫功能。 关键词：苦地胆内酯，嗜水气单胞菌，抗感染，斑马鱼 Ⅱ ofLactonesfrom EfiectandMechanism Protective Scaber Aeromonas Elephantopusagainnst Hydrophila inZebrafish Abstract ofthemost Scabrous scaber)，one herb(Elephantopus popularly elephantfoot