pEGX-4T-2NAP1融合蛋白的原核表达及鉴定.pdf

第 17 卷 第 2 期 湖 南 文 理 学 院 学 报 自 然 科 学 版 Vol. 17 No. 2 2005 年 6 月 Journal of Hunan University of Arts and Science(Natural Science Edition) Jun . 2005 文章编号: 1672-6146(2005)02-0036-04 pEGX-4T-2/NAP1 融合蛋白的原核表达及鉴定 1, 2 1 1 1 2 2 李 峰 , 田宗城 , 赵东海 , 张建平 , 尹志华 , 姚开泰 (1.湖南文理学院生命科学系, 湖南 常德 415000; 2.南方医科大学肿瘤研究所, 广州 510515) 摘 要: 以鼻咽组织cDNA 为模板 PCR 扩增NAP1 基因编 术服务有限公司. BamHI Taq DNA 聚合酶购自华 码区 PCR 产物克隆入pUCm-T 载体 筛选阳性克隆. 构建 美生物工程公司 Not I 为美国Promega 公司产品. NAP1 基因编码区的原核表达载体pEGX-4T-2/ NAP1 转化 T4 DNA 连接酶 Ligase 购自大连宝生物有限公司. 大肠杆菌BL21. 经IPTG 诱导表达后 在不同时段收集菌体 PGEX-4T-2(4 900 bp) 购自 Boehringer Mannheim 提取细菌的全部蛋白. 经 12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检 GmbH 公司. 50×Advantage 2 DNA 聚合酶混合物购 测 发现细菌全蛋白中在35 KD 36 KD 处多出一条明显条 自Clontech 公司. PCR 扩增引物的合成和PCR 产物 带. 用兔抗人NAP1 多克隆抗体 利用Western Blotting 对该 测序由上海博亚生物技术有限公司完成. 胶回收试 融合蛋白的表达进行了鉴定 NAP1 基因的融合蛋白表达成 剂盒购自上海华瞬生物工程有限公司.兔抗人NAP1 功 为制备NAP1 单克隆抗体和获得有生物活性的NAP1 蛋 多克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司制备. 白 进一步研究NAP1 蛋白的功能奠定了基础. ® Phototope -HRP Western Blot Detection Kit 购自 关键词: NAP1 蛋白 原核表达 鉴定 New England Biolabs Inc.. 中图分类号 Q 785 文献识别码 A 1.2 方法 1.2.1 引物设计 我们从UniGene 数据库出发 采用EST 战略成 根据原核表达载体 pEGX-4T-2 的阅读框架设 功克隆了鼻咽癌相关肽基因NAP1 nasopharyngeal 计 引 物 . pFRW-1 carcinoma-associated peptide GenBank 登录号为 5’-GCGGGATCCGAGATGAAGAA AY190326 并对该基因进行了表达特征和生物信 AGTTCTCCTCC-3’ (字符底纹部分为BamH I 酶切 息学分析. 我们的研究结果表明 NAP1 蛋白为滤 序列和3 个随机碱基); pRVS-1: 5’-ATGCGGCCGC 泡树突状细胞 follicular dendritic cell, FDC 分 CTTTTCCTTCTTGTTTACTTTTC-3’( 字符底纹部 泌的一种新的多肽.