人Survivin蛋白的纯化、单克隆抗体的制备及在肿瘤细胞的表达.pdfVIP

中国实验诊断学 年 月 第 卷 第 期 — — ２０１３ １１ １７ １１ 　 　 　 １９３３ 文章编号： （ ） １００７１１－１９３３－０５ 人 蛋白的纯化、单克隆抗体的制备 Ｓｕｒｖｉｖｉｎ 及在肿瘤细胞的表达 樊美荣，徐建军，张 濛，王 兵，张青云 　 　 （北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所检验科，恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室，北京 ） １００１４２ 摘要：目的 表达人 重组蛋白、制备单克隆抗体及检测 在多种肿瘤细胞中的表达。方法 诱导 Ｓｕｒｖｉｖｉｎ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ 　 　 含有 ＭＳＳｕｒｖｉｖｉｎ重组质粒的 表达人 重组蛋白，并作为抗原免疫 ／ 小鼠，取其脾细胞与 ｐ Ｅ．ｃｏｌｉ． ＭＳ２Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ＢＡＬＢ ｃ ／ 骨髓瘤细胞融合，经 双筛，获得稳定分泌抗人 的杂交瘤细胞株。 检测 Ｓ ２０ ＥＬＩＳＡ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｍＡｂ ＥＬＩＳＡ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｐ ｍＡｂ的特异性。免疫细胞化学检测多种肿瘤细胞中天然 Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达情况。结果 诱导菌在相对分子质量为 ３０ 　 ＫＤ左右表达出一新的蛋白条带。筛选出 株稳定分泌特异性抗人 的杂交瘤细胞株，亚类鉴定均为 ２ Ｓｕｒｖｉｖｉｎ ｍＡｂ 类。两株单克隆抗体的效价均达到 ５。 结果显示出抗人 的特异性。在胃癌细胞、 ＩＧ１ ６．４×１０ ＥＬＩＳＡ ＳｕｒｖｉｖｉｎｍＡｂ ｇ 肺癌细胞、宫颈癌细胞中均强表达，且主要在细胞浆中。结论 成功制备出特异性抗人 ，为以后应用于 ＳｕｒｖｉｖｉｎｍＡｂ 　 临床检测奠定了基础，也为其进一步开发成诊断性试剂盒奠定了基础。 关键词：存活素；单克隆抗体；肿瘤；肿瘤细胞 中图分类号： 文献标识码： Ｒ７３０．４ Ａ Ｔｈｅｅｘ ｒｅｓｓ