人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定.pdfVIP

广东医学摇 圆园员猿年员月第猿源卷第圆期摇 郧怎葬灶早凿燥灶早 酝藻凿蚤糟葬造 允燥怎则灶葬造摇 允葬灶援 圆园员猿，灾燥造援 猿源，晕燥援 圆 ·员愿员· 人 型高尔基体膜蛋白苑猿多克隆抗体的 Ⅱ 制备及免疫学鉴定 员 员 员△ 圆 吴玉 ，蔡媛媛 ，徐霞 ，林云恩 员 圆 广州医学院检验系（广州缘员园员愿圆）；广州医学院第一附属医院病理科（广州缘员园员圆园） 摇 摇 【摘要】摇 目的摇 制备人 型高尔基体膜蛋白苑猿（郧燥造早蚤 责则燥贼藻蚤灶 苑猿，郧孕苑猿）的多克隆抗体，为进一步研究郧孕苑猿 Ⅱ 的功能奠定基础。方法摇 利用重组原核表达载体孕耘栽原猿圆葬原郧孕苑猿在大肠杆菌月蕴圆员 中诱导表达，利用切胶方法 回收纯化蛋白，并免疫新西兰兔制备多克隆抗体。制备的抗体经硫酸铵沉淀纯化后，用 耘蕴陨杂粤 法和宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 对多克隆抗体进行效价和特异性检测，用免疫组织化学法（陨匀悦）检测纯化抗体在不同肝组织中识别郧孕苑猿 的能 力。结果摇 郧孕苑猿蛋白表达成功，并成功获得纯化的郧孕苑猿蛋白及兔抗 郧孕苑猿 多克隆抗体；耘蕴陨杂粤 法测定多克隆抗 体效价跃员远园园园；宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼证明多克隆抗体的特异性良好；陨匀悦显示郧孕苑猿蛋白在正常肝组织中仅表达于胆管上 皮细胞，而在肝癌组织中表达于肝癌细胞和胆管上皮细胞。结论摇 成功获得了纯化的郧孕苑猿蛋白及高效价的多克 隆抗体，肝脏组织的陨匀悦验证了其良好的特异性。 【关键词】摇 高尔基体膜蛋白苑猿；肝癌；多克隆抗体 摇 摇 近年新发现的 型高尔基体膜蛋白苑猿（郧燥造早蚤 责则燥鄄 转化成功的单克隆菌落，接种于含有氨苄青霉素的蕴月 Ⅱ 贼藻蚤灶苑猿，郧孕苑猿）被最早报道用于诊断肝细 癌，且特异 培养液中扩增，加陨孕栽郧诱导蛋白表达，并摸索最佳表 性和灵敏度优于目前临床上常用的甲胎蛋白［员原圆］。随 达条件。以菌液韵阅 为园郾远 耀园郾苑 时、陨孕栽郧终浓度 员 远园园 后发现郧孕苑猿在前列腺癌、食管癌、肺癌、精原细胞瘤等 皂皂燥造辕 蕴、诱导温度圆缘益、诱导时间苑 耀愿 澡为条件，诱导 多种肿瘤组织中均有不同程度增加［猿原愿］。因此，郧孕苑猿 蛋白表达，诱导结束后离心收集菌体，超声破碎，收集 可能对肿瘤的发生及发展起到关键作用，建立一种制 上清和沉淀，分别进行杂阅杂原孕粤郧耘 电泳检测。 备高效价及特异性的 郧孕苑猿 抗体的方法对后续研究 电泳后，将胶放入硫酸锌负染溶液（在灶杂韵 苑缘源 郧孕苑猿在肿瘤的生物学功能至关重要。在圆园员员年缘— 皂皂燥造辕 蕴，咪唑苑缘 皂皂燥造辕 蕴，晕葬悦造 圆缘 皂皂燥造辕 蕴）中浸泡员园 员圆月期间，本研究利用课题组已构建的 郧孕苑猿 原核生 皂蚤灶，然后取出放入圆园 早辕 蕴 晕葬 悦韵 中显色，切出透明的 圆 猿 ［怨］ 物表达系统，进一步表达并纯化郧孕苑猿蛋白及免疫新西 目的条带 ，放入透析袋中，置于水平电泳槽中电泳， 兰兔获得多克隆抗体，采用免疫组织化学法验证了 电泳完之后将此透析袋放入装有 孕月杂 的烧杯中透析， 郧孕苑猿在肝癌及正常组织中表达的特异性，为 郧孕苑猿 的 每愿 澡换液 员次共换液猿 耀源 次。纯化的蛋白经 月悦粤 相关后续研究奠定了基础。 蛋白定量试剂盒定量，原苑园益保存备用。 员摇 材料与方法 员援圆援圆摇 多克隆抗体的制备摇 用纯化的郧孕苑猿蛋白免疫