盐酸双苯氟嗪对缺血%2f再灌注性脑损伤的保护作用与机制与研究.pdfVIP

中文摘要 盐酸双苯氟嗪对缺血／再灌注性脑损伤的保护作用 及机制研究 摘 要 目前，临床上急性脑卒中的主要治疗手段是溶栓，但溶栓后的再灌注 往往会加剧脑损伤，因此急需研究和开发能有效对抗缺血再灌注性脑损伤 的药物。盐酸双苯氟嗪是由河北医科大学首创合成的一个新型的桂利嗪类 衍生物。本实验室已通过生理、生化及形态学等多种技术从不同角度证明 双苯氟嗪对缺血／再灌注性脑损伤有明显的保护作用。但是由于双苯氟嗪 较难溶于水，不方便临床上脑卒中病人使用。所以我们将其制成盐酸盐， 增加了其在水中溶解度，使其注射液可直接血管内给药。本研究拟在整体 动物水平与细胞水平建立缺血再灌注脑损伤模型，观察盐酸双苯氟嗪对缺 血／再灌注损伤的保护作用，并进一步探讨其保护机制。 第一部分盐酸双苯氟嗪对大鼠局灶性缺血再灌注所致脑损伤的保护作 用及机制研究 目的：评价盐酸双苯氟嗪在大鼠局灶性缺血再灌注所造成的脑损伤中 的保护作用及其机制 方法：大鼠随机分为假手术组，溶剂对照组，盐酸双苯氟嗪组 模型，各组在缺血再灌注的同时尾静脉注射给药，给药容积为0．2ml／lOOg。 假手术组只行手术通路，不插线栓不给药。缺血2h再灌4h后测定神经症 状、脑含水量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA) 含量，采用HE染色法光镜下观察组织病理变化，采用免疫组织化学染色 法检测AQP．4蛋白的表达，以评价盐酸双苯氟嗪对缺血再灌注损伤的保 护作用，并探讨其可能的机制。 结果： (1)神经功能评价结果显示，假手术组大鼠未产生神经功能 盐酸双苯氟嗪大、中剂量组和Flu组与溶剂组相比有明显下降(PO．01)， 大鼠神经功能评分分别降至6．50a：O．96、7．33士0．94和7．66士0．42。(2)脑 中文摘要 含水量测定结果显示，缺血再灌注损伤后脑组织含水量明显升高至 82．24+0．23％，药物干预后，盐酸双苯氟嗪各剂量组与Flu组大鼠脑含水 清中SOD活性与MDA含量测定结果显示，缺血再灌注损伤后血清中 U／ml，MDA含量明显升高至6．11士0．05 SOD活性明显下降至24．86+0．86 nm／ml，给予盐酸双苯氟嗪干预后，可减轻以上损伤，其中大剂量盐酸双 苯氟嗪作用最为明显，SOD活性提高至61．79士1．09U／ml，MDA含量下 nm／ml。 降为4．644-0．05 (4)HE染色结果显示，假手术组大鼠神经细胞 未见明显病变。溶剂组大鼠缺血侧大脑皮层、纹状体和海马区出现严重的 神经细胞变性坏死，胞体固缩，核浓缩深染，细胞与周围组织形成明显的 间隙，出现空泡变性。高中低三个剂量的盐酸双苯氟嗪可以剂量依赖性明 显改善上述病变。 (5)免疫组化检测AQP．4蛋白表达结果显示，AQP4 主要在血管周围的胶质细胞有阳性表达，表达部位为细胞膜。假手术组胶 质细胞仅有少量AQP．4的表达，缺血再灌注以后梗死周边区域AQP．4的 表达则明显增多。盐酸双苯氟嗪大剂量组(4．60-2：0．31)、盐酸双苯氟嗪中 溶剂组相比均有显著减少(PO．01)。 结论：盐酸双苯氟嗪能够通过清除自由基、抗脂质过氧化及减少梗死 周边区域AQP．4的表达而减轻脑水肿程度，发挥神经保护作用。 关键词：盐酸双苯氟嗪；局灶性脑缺血再灌注；脂质过氧化；脑水肿； AQP-4 第二部分盐酸双苯氟嗪对糖氧剥夺／复氧所致海马神经元损伤的保护作 用及机制研究 目的：评价盐酸双苯氟嗪在糖氧剥夺／复氧所致海马神经元损伤中的 保护作用以及机制研究 方法：体外培养原代海马神经元，7．8天成熟后，细胞随机分为 中文摘要 损伤后的细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、盐酸双苯氟嗪10山aaol／L OD值、LDH漏出、 (Flu)lgmol／L组。分别测定各组神经元细胞MTT 胞内钙离子浓度、NO含量、NOS活性、细胞凋亡率，以评价盐酸双苯氟 嗪的保护作用并研究其机制。 结