LCMSMS定量分析流程与经验.pdf

LC-MS/MS定量分析流程与经验 美国应用生物系统中国公司 应用技术服务部 Opportunities in the Services and System Solutions Market 第一步：Q1 SCAN——确定母离子的质荷比 ●根据待测化合物性质，选择分析的极性(＋/ －)、离子化 方式(ESI/APCI)，根据分子量选择扫描范围和时间 ●确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。 参数设置： 扫描方式：Q1 Scan 质量范围：Parameter Range，100～MW+30，t=1～2sec Center Width，MW±5Da，t=0.5sec 通过手动调节DP、GS1，使喷雾平稳、有效 2 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 第二步：Product Ion Scan —— 确定子离子的质荷比 ●得到高质量的MS2图，母离子的强度为图谱中基峰强度 的1/3到1/4为宜 ●平滑后选择子离子质荷比，确定到小数点后一位 参数设置 扫描方式：Product Ion Scan 质量范围：Parameter Range，50～MW+10，t=1～2sec 通过手动调节CE 3 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 第三步：优化化合物参数 ●根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对 ●选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间 ●用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source 项下CAD参数。各离子对应分别设定。 ●初步建立MRM方法 ●一般优化两次，以得到比较确切的结果 4 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 第四步：方法转化：将连续进样方法→LC-MS方法 ● 关掉所有质谱分析界面，将现有质谱体系灭活，激活液相色谱、 质谱设备。 ● 单击Acquire 中Build Acquire Method，打开上面保存过的MRM 方法，添加设备：色谱泵、自动进样器等。 ● 设置色谱同步。 ● 设置色谱参数，分析时间一般为0.6～1min，流动相组成和流量 与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间，与色谱参数一致； 设置GS1、GS2、TEM初始值为40 、40 、400左右，保存方法， 例如：LC-MRM.dam。 5 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 第五步：FIA-优化Source参数 ●将前面用过的样品溶液稀释100～1000倍。 ● 在Tune项下，双击Quantitative Optimization，选择FIA分析， 根据向导进行自动优化。不接色谱柱进行FIA定量优化 ● 注意：需要优化的各可选值之间用“;”分隔。 ● 当对源参数含义及设置比较清楚后，可以省略此步。 6 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 第六步：色谱条件优化 ●接好并平衡色谱柱，用适当浓度标准品考察分离情况 ●根据色谱分离情况，会设定梯度洗脱 ● MRM方式可以不必所有峰都基线分离，但要注意避开 基质离子抑制的干扰