衍生化试剂在液相色谱中的应用.pdf

衍生化技术在液相色谱中的应用 衍生化定义 衍生化是色谱分析中常用的一种辅助手段。 原理是待测样品与具有特定功能基团的衍生化试剂通过定 量快速反应，生成符合分析要求的衍生化物，通过检测衍 生化物的量来间接测定待测样品的量。 衍生化目的 改变待测物的色谱保留特性以改善分离度。 改变待测物的检测特性，以增加其对检测器的响应 （例：紫外标记、荧光标记、电化学标记） 生成稳定的衍生化物，改善待测物的不稳定性 （例：-SH基团易氧化的问题可通过酰化来解决）。 衍生化反应的要求 对反应条件要求不苛刻，且能迅速定量地进行。 对目标物只生成一种衍生物，反应副产物（包括过量的衍 生试剂）不应干扰目标物的分离与检测。 化学衍生试剂方便易得，通用性好。 HPLC化学衍生化分类 在线化学衍生化 ★是否与HPLC系统联机 离线化学衍生化 柱前衍生化 ★发生衍生化发应的先后 柱后衍生化 柱前衍生 定义：在色谱分离前，预先将样品制成适当的衍生物，然后再进入色谱柱进 行分离检测。 优点：（1）对用作流动相的溶剂体系没有限制； （2 ）反应条件，反应速率不受限制； （3 ）通过选择合适的试剂以及萃取方法，可以消除许多干扰； （4 ）转变成合适的衍生物，可使分离度改进。 缺点： （1）操作过程繁琐，容易影响定量准确性； （2 ）当一个复杂组分样品经过衍生化反应后，有可能产生多种衍生 化产物给色谱分离带来困难。 柱后衍生 定义：将样品先注入色谱柱，按选定的色谱条件使样品组分得以分离，当各个 组分从色谱柱流出后，分别与衍生化试剂相遇，在一定的反应条件下，生成具 有某种检测特性的衍生化产物再进入检测器。 优点：（1）操作简便，可连续反应以实现自动化分析； （2 ）被分析物可以在其原有的形式下进行分离，容易选用已有的分析 方法。 缺点： （1）在色谱系统中反应，对流动相的选择更严格，必须考虑衍生化试 剂、反应产物的溶解度，以及它们与流动相可能发生的副反应；反应速率必须 很快（小于30s ）；检测器对衍生化试剂不能有响应； （2 ）需要附加的仪器设备，如输液泵、混合室和加热器等，还会导致 色谱峰展宽。 柱后衍生流程图 色 检 记 进 色 检 记 进 谱 反应器 测 录 样 谱 反应器 测 录 泵 样 泵 柱 器 仪 阀 柱 器 仪 阀 衍生化试剂泵 衍生化试剂泵 衍生化反应类别 紫外衍生化 荧光衍生化 电化学衍生化 手性衍生化 紫外衍生反应 在液相色谱法中，紫外吸收检测器是最常见的一种选择性、高灵敏度 检测器。但很多化合物在紫外可见光谱区无吸收，无法检测。将它们 与带有紫外吸收基团的衍生试剂在一定条件下发生反应