HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定.pdf

第23卷第4期 江苏大学学报(医学版) v01．23No．4 of 2013年7月 Joumal Jul_2013 Jiangsuuniversity(MedicineEdition) HIV一1死去基因重组原核表达载体的构建及融 合蛋白的表达纯化与功能鉴定 邱会平1，程晓东2，卢春2 (南京医科大学1．基础医学实验教学中心，2．微生物学与免疫学系，江苏南京210029) [摘要] 目的：在大肠埃希菌中表达人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiencyvims‘ypel，HIv一1)反式激活蛋白 activative (trans fransc’riplion 酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(sDs—PAGE)和蛋白质印迹鉴定后，通过镍亲和层析柱纯化。纯化后蛋白采用虫荧光素酶 报告实验进行功能验证。结果：限制性内切酶酶切和基因测序证实，成功构建了含有死f基因的重组原核表达质粒。 蛋白质印迹结果显示，His融合蛋白在大肠埃希菌中得到正确表达，纯化后获得了相对分子质量为18×103的融合蛋 te瑚inal 白。虫荧光素酶报告实验证实，Tat与HIV—l长末端重复序列(10ngrepeat，LTR)具有结合能力。结论：重组 生物学功能、 [关键词]死￡基因；原核表达；融合蛋白； 人免疫缺陷病毒；卡波氏肉瘤病毒 [中图分类号]R34；Q78[文献标志码]A [文章编号] 1671—7783(2013)04—0308一05 Constructionof Vector HIV死f prokaryotic expressioncarrying gene andthe and identificationofrecombinant expression，purification 死finE．cD历 QlUHui—p汛善，C珊ⅣG C^Mn2 Xino—do，W2，LU (1．The Cen忙rforBasicMe(jical of and LaImraIory Sciences，2． Medical D印artmenIMicmbiologyImmunology，Nanjing L_niversity，Nanjing 210029，China) Jiangsu constructthe vector HIV一1 [Abstract]ObjectiVe：To prokaryoticexpression andto carrying7饥gene pu． thefusion in DNA ofthe from rify E．co丘．Methods：The protein