EIAV疫苗株gp90基因多克隆构成和体内进化及免疫保护相关性.pdfVIP

摘 要 中国马传贫(EIA)弱毒疫苗，是可良好诱导针对慢病毒的免疫保护并唯一被成功大规模应 用的慢病毒疫苗。明确EIA弱毒疫苗致弱和诱导免疫保护的机制，将对慢病毒免疫机制研究和制 定疫苗研制策略提供有益的参考。本文选择中国EIA驴胎皮细胞适应性弱毒疫苗EIAVFDDv为研究 对象，对该弱毒疫苗的病毒种群构成和体内复制特点及二者与诱导免疫保护的相关性进行了探讨。 使用RT-PCR和克隆测序技术，对EIAVmDvgp90基因的多样性进行了分析。随机获得的52个 合进化树和推导的氨基酸序列的聚类分析结果，提示经过无宿主特异性免疫压力的长期体外传代 培养得到的EIAVmDv，其病毒种群存在着丰富的基因多样性、呈混合构成状态。我们将该构成特 性，称作“多克隆构成”。 株可以克服宿主的天然免疫压力对宿主进行感染。2．4个月时，疫苗弱毒株在宿主体内以趋于单一 的、且可能相对于亲本强毒珠出现回复突变的准种形式存在。免疫后4．6个月时，趋于单一的、且 基因构成与EIAVFDDv较为相近的病毒种群，将替代2．4个月时发生突变的病毒种群作为免疫成熟时 的准种，相对稳定地存在于宿主血浆中。同时，血浆病毒载量监测结果表明，免疫成熟过程中， 外周血游离病毒粒子的RNA拷贝数在102_105拷贝／ml范围内的低拷贝水平波动。 使用连续给予地塞米松的方法，对EIAVFDDv免疫成熟马匹进行了免疫功能抑制，并对比监测 了免疫抑制前后马匹血浆中疫苗毒株的载量。监测结果表明，3匹免疫马在免疫功能受抑制后，2 量变化的正常范围。该实验结果提示，疫苗毒株的生物学特性，而非免疫压力是EIAVFDDv在宿主 血浆中低拷贝存在的主要原因。而在免疫系统功能受抑制状态下，疫苗株在马体内仍维持稳定的 低拷贝复制状态，支持了疫苗株EIAVFDDv应用中的安全性。 EIAVFDDV3-8，分别免疫马匹，并在免疫成熟后进行攻毒。攻毒实验结果表明，多克隆构成的 要原因。该实验结果支持EIAVmDv的多克隆构成特性，在其诱导免疫马匹产生良好免疫保护中起 作用。 本论文获得的研究结果，作为对EIAV疫苗弱毒株生物学特性评价的基础数据，不仅可以帮 助我们更多的了解疫苗弱毒株的生物学特性，而且对深入研究疫苗弱毒株诱导免疫保护的机制也 十分必要。 关键词EIAV啪v多克隆构成体内复制动态中和抗体免疫保护机制 Abstract TheChineseEIAV vaccine attenuatedinducesexcellentimmune theinfectionof protectionagainst virulent is strains．Itthe lentiviralvaccinethat tocontrolthe ofa only successfullyapplied spread diseasedina ofhow EIAV country．Theprinciple the vaccinereducedthevirulenceandobtainedthe toinducesolid should valuable for informationthe onother ability protectiveimmunityprovide study lentiviral vaccinestOAIDS．inthis chosethefetal dermal vaccines，inducing study,we donkey cells ofEIAV induced than adaptedvaccine(EIAV