FK506治疗急性脊髓损伤实验研究.pdfVIP

FK5 06治疗急性脊髓损伤的实验研究 博士生姓名： 刘 阳 寺旨导教师： 吕德成 教授 指导小组： 张卫国 教授 战丽彬 教授 专业名称： 中西医结合临床 摘 要 急性脊髓损伤(AcuteCord SpinalInjury，ASCI)是一种严重的神经 系统损伤，给个人、家庭和社会带来巨大经济负担，且我国的发病率又 较发达国家高。因此，治疗急性脊髓损伤，恢复或者减少神经损害具有重 要的意义。但是脊髓损伤的治疗至今仍是医学界的难题之一。 急性脊髓损伤目前分为原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤。原发性 脊髓损伤为机械性损伤，受伤程度由受伤当时决定，损伤不可逆，因此 无法对其损伤机制进行有效的治疗；继发性脊髓损伤是发生于原发性脊 髓损伤之后的一系列损伤，可被控制，具有可逆性，决定了脊髓损伤后 的愈后，因此急性脊髓损伤的治疗关键切入点在于继发性脊髓损伤的治 疗。目前关于治疗急性脊髓损伤的策略主要是保护神经元，防止其继发 性损伤和凋亡；促进神经轴突生长。研究表明某些药物可以影响和干扰 继发损伤的过程。目前治疗脊髓继发性损伤的药物主要分为西药和中药 两大类。 FK506又名他克莫司：属于大环内酯类抗生素，具有极强的免疫抑 制作用。近年的研究表明FK506不但具有免疫抑制作用，还具有神经保 护和神经营养作用。FK506的神经保护机制与抑制钙调神经磷酸酶(CaN) 有关。FK506作为CaN抑制剂，主要的副作用之一就是神经毒性。有研究 表明，FK506的神经毒性发生率与药物浓度存在显著的相关性。因此通 过观察不同浓度下FK506对背根神经元生长的影响，寻找促进神经元生 长的最佳药物浓度，避免出现该药物的神经毒性副作用，可为该药物治 疗急性脊髓损伤提供理论依据。 由于FK506易穿透血脑屏障，有效血药浓度低，在使用过程中往往 有很大的副作用，神经毒性是其主要副作用之一。在治疗急性脊髓损伤 时，如何既达到治疗效果，又同时减小毒副作用是面临解决的问题。调 整药物给药方式和给药速度是解决这一问题的方法之一。局部药膜应用 可以减少药物剂量，使局部达到一个较高的药物浓度；持续缓释药物可 以减少血药浓度波动进而减少药物的毒副作用。本实验通过局部应用 FK506缓释药膜治疗大鼠急性脊髓损伤，观察神经恢复情况，进而研究 该方法的可行性。 滋补脾阴方药由人参、丹参、山药、白芍等组成。目前研究表明滋 补脾阴方药具有神经保护作用。但是与FK506联合应用是否具有对神经 元的保护和促进突起生长目前没有相关研究。通过观察两种药物以及联 合应用的情况下对背根神经元生长的影响，可进一步研究两种药物的神 经保护作用及该两种药物联合应用治疗急性脊髓损伤的可行性。 第一部分 不同浓度FK506对新生大鼠脊髓背根神经元生长的影响 目的：观察并寻找促进新生大鼠脊髓背根神经元生长的最佳FK506 浓度。 方法：取8只新生24hSD大鼠的背根神经节，剥除神经外膜，剪成 约1mm3大小的碎块，用O．25％胰蛋白酶消化后进行纯化培养，建立体 外新生大鼠脊髓背根神经元培养体系。培养96h后，将背根神经元分为： nmol／LFK506组(C 空白对照组(A组)、100pmol／LFK506组(B组)、1 组)和1 荧光法观察神经元生长情况，四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞 活力及逆转录聚合酶链式反应法(RT．PCR)检测生长相关蛋白一43信使 核糖核酸(GAP．43mRNA)的表达情况。 结果：免疫荧光结果显示C组的背根神经元数量和突起的长度生长 明显优于A组、B组和D组，B组神经元生长情况优于A组，D组的神 的相对表达量高于A组，没有统计学差异差异(P0．01)，C组的MTT 统计学意义(P0．0 表达量明显低于A组，差异有统计学意义(P0．01)。 结论：1nmol／L浓度的FK506对大鼠脊链背根神经元生长的促进和