几株IBV弱毒对流行毒株CK%2fCH%2fLDL%2f97I免疫的保护作用评价.pdfVIP

摘要 摘 要 InfectiousBronchitis 鸡传染性支气管炎活疫苗在鸡传染性支气管炎病毒(Avian Virus， 1 苗H20，H52外，还有许多由地方分离株通过鸡胚致弱制备的商品化活疫苗被用于IBV的防 Bronchitis 制，而且大多数疫苗的分子背景不清楚。鸡传染性支气管炎病毒(InfectiousVirus， IBV)血清型众多，不同血清型之间交叉反应小或不具有交叉反应性，因此世界各国均选择 与本地区流行血清型相匹配的毒株进行鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)弱毒疫 苗的研制。为了调查我国IBV疫苗株的来源和进化及其与IBV分离株之间的系统发育关系， VF110、tl／CH／LDT3／03F120和 株鸡传染性支气管炎致弱毒株cK／CH／LHu／04 CK／CH／LDL／97I F115和当地流行毒株CK／C：H／LDL／97I作为研究对象，对其Sl基因进行 序列比对分析，通过序列比较，分析疫苗株与参考株相应基因之间的序列同源性；根据结构 蛋白基因和非结构蛋白基因的核苷酸序列构建系统发育树，分析疫苗株与参考株之间的系统 发育关系，同时阐明我国IBV的基因型，探讨我国IB流行的背景和原因。 IBV SI蛋白能诱导机体产生病毒中和抗体、血凝抑制抗体，在病毒致病性和组织嗜性等 方面均具有重要作用，因此目前对于IBV致病力的研究主要集中于s1基因。首先对不同毒 株及参考毒株的s1基因进行比较和系统进化树分析，研究了CK／CH／LDL／97I与其他病毒的 基因型关系。证明CK／CH／LDL／97I属于有别于其它IBV毒株的一个独立的基因群。在此基 础上，通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临诊症状、病理变化观察以及气管和肾 脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK／CH／LDL／97I的免疫效力。 对其Sl基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸 序列同源性分别不超过76．4％和78．7％。其氨基酸系统发育进化树分析发现，CK／CH／LDL／97 I与Ql、J2、T3属一个群。以上结果表明：CK／CH／LDL／97I与Q1、J2、T3属于我国近年 出现的一种新的基因型IBV。 F110、tl／CH／LDT3／03F120、 H120，J9)和3株鸡传染性支气管炎致弱毒株(cl‘¨CH厂LHLJ加4V CK／CH／LDL／97 I Fl15)进行免疫保护试验。180只SPF白莱航鸡随机分成9组(20只／组)， 饲养在负压隔离器中。在15日龄时分别用此8株弱毒苗经滴鼻途径对1—8组鸡进行免疫接种， 第9组鸡用作阴性对照。从免疫后20天，用间接ELISA能从所有免疫鸡的血清样品中检测 到抗体，证明此5株商品疫苗和3株人工致弱毒均可刺激机体产生体液免疫应答。在35日龄 时，用异种分离株CK／C：H／LDL／97I对所有试验鸡进行攻毒。攻毒后3天，部分免疫鸡群开 始出现IB的临床症状，发病率为0～100％、死亡率为0；非免疫鸡群的发病率为l00％，死 亡率为10％。死亡的免疫鸡和非免疫鸡的病理变化主要表现为：肾脏肿大、苍白，肾小管和 输尿管有白色的尿酸盐沉积，外观呈现典型的“花斑肾”。攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡， 采集器官，应用RT-PCR法检测病毒，气管样品病毒检出率为50％-90％，肾脏样品病毒检 I F115对CK／CH／LDL／97I强毒的 出率为lO％～30％。然而，同种致弱毒株CI∞H／LDL／97 攻击可提供100％的临诊和病毒分泌的保护性。由此可见：我国目前使用的主要活疫苗对异 VI