猪链球菌2型毒力相关蛋白的原核表达及体外试验评估重组蛋白的免疫源性和的保护性.pdf

摘 要 suis 猪链球菌2型(Streptococcustype2)是--种重要的人兽共患病原菌，猪链 球菌的发病机制至今仍不十分清楚，能否研制出针对我国致病猪链球菌2型的有 效疫苗和诊断试剂直接关系着猪链球菌病在我国的有效预防和控制。目前猪链球 菌疫苗主要有3种类型：减毒活疫苗；已发现的毒力因子；具有免疫原性的细胞 壁膜蛋白。本人所在的课题组应用免疫蛋白质组技术体系开展了一定的工作，目 前已经鉴定了31个猪链球菌2型新的免疫原性抗原分子。 在此基础上针对这些鉴定出的候选分子设计引物，以98江苏人源分离株 表达载体中。重组质粒经限制性酶切鉴定和测序，转化至大肠杆菌BL21，IPTG 诱导后，获得了重组蛋白的高效表达。蛋白经过镍亲和层析柱层析，获得纯化的 鼠，获得抗血清并测定滴度大于等于105。间接ELISA实验证明患者血清及免疫 后猪血清中存在与重组蛋白相应的特异抗体。利用抗血清调理猪链球菌后进行的 体外杀伤试验证明部分重组蛋白具有与公认的强毒力因子MRP相当的免疫保护 作用。这些工作为发现新的保护性抗原，深入研究新的保护性抗原的可能生物学 功能提供了重要的参考依据，为寻找与毒力密切相关的抗原作为重点研究和开发 的疫苗候选分子等后续工作奠定了基础。 关