生姜总姜酚和总黄酮制备及对PC12细胞拟脑缺血模型的保护作用及研究.pdf

摘要 摘要 目的： 提取分离生姜总姜酚、总黄酮，并对其进行含量测定以及PCI2细胞 的损伤抑制研究，为生姜抗脑缺血有效部位的深入研究奠定基础。 方法： 1．采用75％乙醇，按1：3(m：v)比例对生姜中的主要成分进行提取。提取 物以甲醇溶解除杂，浓缩甲醇溶出物得浸膏。以聚酰胺为柱层析材料，以不 同浓度乙醇一水溶液为洗脱剂，对生姜浸膏进行分离。采用硅胶G板，以石油 醚一乙酸乙酯(7：3)为展开剂，5％盐酸酸性三氯化铁乙醇溶液和三氯化铝乙醇 溶液为显色剂进行薄层(TLC)检测，50％乙醇洗脱部分为姜酚类化合物，减 压蒸干得总姜酚干膏；95％乙醇洗脱部分减压蒸干得总黄酮干膏，并用紫外分 光光度法对生姜总黄酮进行含量测定。 以石油醚．乙酸乙酯(7：3)为洗脱剂，以硅胶为柱层析填料对总姜酚进行 粗分；以6．姜酚、8．姜酚为对照品，分别吸取洗脱液5．109l，点于硅胶G薄 层板上，以石油醚．乙酸乙酯(7：3)、氯仿．甲醇(9：O．5)为展开剂，5％盐 酸酸性三氯化铁乙醇溶液显色；根据TLC检测结果合并洗脱液，浓缩蒸干。 流动相：甲醇．水(65：35)，对总黄酮进行分离纯化得到单体化合物。 2．采用H202造成PCI2细胞损伤模型，通过倒置显微镜观察细胞的形态， M丌法测定了解PCI2细胞损伤情况和存活率，研究6一姜酚、8一姜酚、总姜 酚、总黄酮和对照品的细胞保护作用； 结果： 1．共提取生姜27．06 kg，得生姜75％乙醇提取物干膏0．8kg，提取率为2．96％。 姜酚分离出6一姜酚，8-姜酚两个单体化合物。 2．86％， 以芦丁为对照品，测得生姜总黄酮提取物中黄酮类化合物含量为1 (40．6rag)。以生姜黄酮I为对照品，以高效液相色谱法测得生姜总黄酮中黄 酮I的含量为0．79％。 01P0．01)。 可明显提高A5700D值，显著提高PCI2细胞生存率(P0．05 8一姜酚的As700D值与损伤组比较无显著差异，无统计学意义。 结论： 1．以该提取方法提取生姜总姜酚和总黄酮，操作简便。结果准确可靠，为进一 步研究生姜中总姜酚和总黄酮的提取工艺提供理论依据。 2．6一姜酚1州、10pM，总姜酚1 的PCI2细胞具有明显的保护作用。 关键词：生姜；姜酚；总黄酮；脑缺血 Ⅱ Abstract Abstract and thecontent flavonoidsin of and objective：Toprepareassay gingerols green to the effectsoncerebralischemiainratsandthe rhizomes，andstudyprotective inhibitioneffectsinthe inducedischemiainculturedrat H202 cells(PCI2)． Methods： 1．111etotal in rhizomeswereextracted gingerolsgreen by wasusedastheeluentto detectthe gingerols column．To prepare bypolyamide 50％and95％eth