重组人促红细胞生成素对大鼠视神经的保护作用实验及研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 重组人促红细胞生成素对大鼠视神经保护作用的实验 研究 目 的 视神经(opticnerve，ON)的损伤是许多视网膜和视神经疾病发展到最后导 致视力下降甚至丧失的常见原因，目前临床上没有有效的治疗方法。ON由视网膜 神经节细胞(retinal ganglion oN损伤时导致视功能不可逆性损害的主要原因。如何能够促进和诱发损伤的RGCs 修复和再生，从而使0N功能恢复是目前研究的热点。但是目前在临床上，对oN损 伤后RGCs存活与轴突再生的治疗还没有既安全又有效、能够推广应用的方法。 human 重组人促红细胞生成素(recombinant 种在临床上已经广泛应用的药物，从目前的研究结果看，可以肯定其有神经保护 作用。ON作为中枢神经系统的一部分，在其发生损伤时，也可能有rhEPO的神经保 护作用参与。然而目前关于rhEPO在0N损伤性疾病中保护RGCs作用的研究报道很 少，确切的机制也不明确。 为明确rhEPO是否能在离体及活体时均能促进RGCs存活和再生，进而促进视神 经功能修复，我们拟观察rhEPO对体外培养的大鼠RGCs存活及其轴突生长的影响， associated 检测作为神经再生标志的生长相关蛋白43(Growth protein43，GAP --43)的表达情况；为模拟临床上大多数0N损伤性疾病时其不完全性损伤的状态， 我们制作大鼠ON夹伤模型，以使神经损伤的状态更接近于临床的疾病状态，并采 取rhEPOH艮局部给药的方式(玻璃体腔注射)，以避免rhEPO全身应用的副作用， 化，来检测rhEPO在ON损伤后促进神经功能修复的作用；同时探讨rhEPO的最佳应 用剂量，以期为治疗视神经损伤性疾病探索一种安全有效的方法。 方 法 微镜下观察细胞和轴突生长情况，测量细胞最长突起长度进行比较。行GAP一43的 Western blot检测，图像分析系统对两组标本进行灰度值测量。结果行t检验。 2、制作大鼠0N夹伤模型，分为治疗组(rhEPO组)和对照组(生理盐水组)。 同剂量治疗组和对照组又按夹伤后处死的时间点不同，分为伤后1w、2w、4w三个 时间点。模型制作完成当时立即使用微量进样器向术眼玻璃体腔内进行注射，不 u 同剂量治疗组分别注入5U、15U、50U的rhEPO，对照组则注入51生理盐水。 u 3、分别于伤后1w、2w、4w三个时间点处死大鼠摘除眼球，制作5m视网膜 切片，行Thyl．1和GAP一43免疫组化染色。每张切片分别随机选取5个镜下视野 框(400X)，采集镜下图像，应用图像分析系统对结果进行分析。计数Thyl．1 染色阳性细胞数，测量GAP一43阳性表达的平均灰度值，结果行方差分析。 4、利用大鼠0N夹伤模型，不同组分别于0N损伤前、损伤后即时、伤后1w、 伤后2w、伤后4w进行F-VEP检查，测量P1波峰潜时和振幅进行比较，结果行方 差分析。 结果 l、培养3d的RGCs倒置显微镜下观察，形成典型的细胞突起，rhEPO组的细 胞比对照组胞体更大，突起更长(P(O．05)。 Western 2、培养3d的RGCs行GAP-43 达，rhEPO组呈强阳性表达，两组差异有统计学意义(P0．05)。 3、在大鼠0N夹伤模型中，oN损伤后RGCs数量随时间推移而递减。在每个 组和50 和50 U—rhEPO组之间比较没有明显差异(DO．05)。 4、GAP一43的免疫组化染色：正常大鼠视网膜上未检测到GAP-43的阳性表达。 在大鼠oN损伤后1w时视网膜上出现GAP-43较强的阳性表达，主要存在于神经节