间充质干细胞不同单克隆神经分化潜能研究.pdfVIP

L．．………………………………………………8 ·中文论著摘要· 间充质干细胞不同单克隆神经分化潜能的研究 刖 吾 问充质干细胞(MesenchⅥnal 种多能干细胞，它包含不同的克隆亚群，这些克隆亚群之间在细胞形态、增殖能 CeU 力和细胞功能上存在差异。单细胞克隆(Sin百eCloning，SSC)是由单个细 胞不断分裂扩增而形成一个更纯的细胞群。建立MSCs的单细胞克隆，即形成 MSCs的不同细胞亚群，非常适合于研究MSCs不同细胞亚群的生物特性和分化 能力等方面的差异，是研究这些不同克隆亚群之间差异的很好的模型。 目前，MSCs移植用于治疗疾病的报道已经很多，但是MSCs疗法普遍的问 题是注射后能够存留的细胞数量有限，细胞成活率却较低。而这数量仅存的细胞 只有极少量的分化为神经细胞，这是治疗效率低的一大瓶颈问题。在未来的研究 和临床治疗应用中，我们渴望找到分化能力最强的克隆，这样理想的克隆可以用 来做优良的种子细胞，将来利用克隆亚群针对性治疗疾病对于治疗效果的提高具 有极其重要意义。 然而，如何区分并筛选出分化能力不同的MSCs克隆亚群?如果有这样的区 分亚群的标记物，那么问题就迎刃而解了。但是，在目前的研究水平，要精确的 区分Mscs分化能力不同的亚群还不太可能，目前还没有找到区分不同克隆亚群的 标志物。 隆之间神经方向分化潜能是否存在差异，以及miRNA一9对MSCs神经分化潜能的 影响。并探讨是否可以用miRNA一9来作为神经方向分化能力差异的标记物，为今 后的研究做铺垫。 实验方法 一、MSCs的培养和单克隆制备 培养全骨髓细胞，随着换液和Mscs的增殖，可以得到纯度95％以上的MSCs。 原代MSCs传代时，制备1／100Ird细胞密度的细胞悬液，种植在96孑L板中，每个孔 加100“1细胞悬液，也就是每个孔有一个细胞，这一个细胞长成细胞集落，即是 单克隆细胞群。 收集不同的克隆亚群，所收集的所有克隆miRNA．9的表达量的均值作为1，各 的计算也同样。按照miRNA．9的相对表达量的差异，把收集的克隆分成三组。用 Real—time 关性分析。 neuroDl的变化情况 方向分化的作用。 实验结果 一、MSCs的培养和单克隆的制备 原代培养24h后，小部分细胞贴壁，细胞梭形不明显。48h后可见细胞集落。 单细胞克隆第3天时可见几十个细胞的小集落。第5—7天集落铺满。不同的克隆 生长速度和细胞形态之间有差异。 neuroDl的总和正相关。 neuroDl的变化情况 2 转染后各时间段miRNA．9含量均比未转染的MSCsmiRNA一9含量增高。其中 转染24h 达量升高，其中72h表达量最高。说明miRNA．9能够促进MSCs向神经方向分化。 结 论 1、MSCs存在神经方向分化潜能不同的克隆亚群。 2、转染miRNA一9会促进MSCs向神经方向分化。 关键词 MSCs；单细胞克隆；分化潜能；miRNA．9；nestin；neuroDl 3 ● 英文论著摘要 ● ofdifferent neuroaldifferentiaon of potential Study cell ofMSCs singleclonings Introduction cellswhichare S