进展期胃上部癌局部浸润特点的分子病理学及研究.pdf

·中文论著摘要· 进展期胃上部癌局部浸润特点的分子病理学研究 刖 吾 胃上部癌或称近端胃癌(proximalgastriccancer,PGC)，是发生于胃近侧l／3 的癌，包括责门癌和非贲门胃上部癌。近年来，无论在欧美还是在亚洲国家，其 发病均呈明显上升趋势。胃上部癌具有明显不同于中、下部胃癌的临床病理特点， 表现为病期较晚，侵袭范围广，恶性程度高，预后不良，手术后5年生存率仅为 20％35％。越来越多的学者主张将其作为一种不同于其他胃癌的独立疾病进行 诊治和研究。 浸润生长是恶性肿瘤最重要的生物学特征之一。研究表明，胃上部癌比中、 下部癌具有较强的近侧浸润倾向。癌细胞可沿粘膜或粘膜下直接向食管浸润，而 门样屏障结构，利于癌细胞向近侧侵袭。对食管受侵程度估计不足是造成手术后 癌残留的主要原因。文献报道，胃上部癌术后近侧切缘癌残留率达5％10％，明 显高于远侧切缘，而病灶的近侧浸润距离是确定手术径路和食管切除范围的重要 依据，因此，多数学者集中在近侧浸润的研究，对远侧浸润特点及近、远侧浸润 范围和程度的比较鲜有报道，且结论尚不一致。 基质金属蛋白酶(matrix 的重要成员，具有高度的蛋白降解能力和广泛的底物特异性，能高效降解Ⅳ型胶 原、弹力素、层粘连蛋白、纤维粘连蛋白等多种ECM和基底膜成分，在胃肠癌 等上皮来源的恶性肿瘤中呈高表达。文献报道，MⅧ．7表达强度与胃癌病灶的浸 润能力呈正相关，认为它代表了肿瘤的浸润特征。S100A4是1989年发现的一种 肿瘤转移相关基因，其编码蛋白属cap结合蛋白S100家族的成员。研究证实， S100A4可通过多种机制，在多个阶段促进肿瘤的侵袭和转移，其过度表达被认为 是肿瘤高侵袭能力的象征。 本研究首先通过病理大切片方法比较进展期胃上部癌近、远侧浸润距离的差 blot 异，分析浸润范围和程度与胃癌病理因素的关系；迸一步以RT-PCR和Western 方法检测病灶近、远侧边缘和中央区的MMP．7、S100A4表达，研究其表达水平 与胃上部癌生物学行为的关系，及其在癌浸润过程中的作用。 材料与方法 1、研究对象 收集42例原发性进展期胃上部癌手术切除标本，其中贲门腺癌27例，非贲 门胃上部癌15例。所有患者术前未经化疗或放疗，病灶均为单发，术后上、下切 缘病理切片检查除外癌残留。 2、病灶标本收取和存放 标本离体后，立即在肿瘤对侧剖开胃壁，将其充分伸展，沿纵轴于病灶近侧 边缘、远侧边缘和中央区分别剪取瘤组织，并取未受累粘膜作为对照。组织存放 于．80℃超低温冰箱中，用于RT-PCR和Westernblot检测。沿病灶纵轴连续取材 6--8条标本，每条宽约0．3cm，包括病灶近侧组织全长、病灶纵轴全长及远侧 5．0__6．0cm组织。分别测量标本上缘至病灶上缘、标本下缘至病灶下缘的距离， 然后将标本展开固定于木板上，浸入10％甲醛溶液固定48小时以上，用于制作 癌浸润组织病理大切片。 3、病理大切片制作及浸润距离测定 取固定后条形标本，分别于病灶近、远侧边缘切断，将上、下两部分用于制 作癌浸润组织病理大切片。切片厚度5ttm，常规行HE染色，于光镜下以目镜测 微尺测量并记录病灶边缘至癌细胞浸润最远处的垂直距离。根据同一组织在固定、 脱水、包埋等过程中各部分均匀变化的原理，将切片测得浸润距离换算为离体后 标本的实际浸润距离。 2 4、RT-PCR检测 组织匀浆后以1瞰zol试剂提取细胞总RNA，通过逆转录反应将其转化为 为内对照，进行PCR扩增；PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳后分析图像，计算 目的基因相对表达量． 5、Westernblot检测 组织加入裂解液，匀浆后离心，取上清以酚试剂法检测蛋白浓度，并以最低 浓度为基础将各样本蛋白浓度调整一致。每孔加样50pg，行SDS聚丙烯酰胺凝 胶电泳。电泳后在转印槽中转膜，将硝酸纤维素膜封闭，加入MMP．7或S100A4 或内对照B．actin兔抗人多克隆抗体，4℃孵育过夜。次日将膜置于碱性磷酸酶标 (AP)显色5min，沥干膜，扫描成像。以Sen