SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量.pptVIP

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 生化社团 吕炎 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果分析 五、注意事项 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理。 掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术。 二、实验原理 SDS的性质与作用 聚丙烯酰胺凝胶的性质 SDS的性质与作用 十二烷基磺酸钠(SDS) Sodium dodecyl sulphate CH3-(CH2)10-CH2OSO3--Na+ 聚丙烯酰胺凝胶性质 聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺（Acr）和甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下，聚合交联而成的。 聚丙烯酰胺凝胶(PAG)具有三维网状结构，能起分子筛作用。用它作电泳支持物，对样品的分离取决于各组分所带电荷的多少及分子大小。 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)还具有浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH梯度作用，将样品压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。 三、实验步骤 制备分离胶 制备浓缩胶 电泳及染色 凝胶板剥离与染色 凝胶板剥离与染色 电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标记后放在大培养皿内，加入染色液，染色1小时左右。 脱色：染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，直到蛋白质区带清晰。 剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分. 影响电泳速度的外界因