37个氨基酸多肽片段对Con+A诱导的急性肝损伤的保护性作用及其机制的研究.pdf

目 录 中文摘要……．………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………．…………4 A诱导的急性肝损伤的保护性 研究论文36个氨基酸多肽片段对Con 作用及机制研究 前言……………………………………………………………………．8 日U吾……………………………………………………………………· 材料与方法……一……………………………………………………．．9 皇口刁……………………………………………………………………结果………………………………．……………．……………………．15 附图……………………………………………………………………18 讨论……………………………………………………………………28 结论……………………………………………………………………31 参考文献………………………………………………………………31 综述NK和NKT细胞在肝损伤中的作用……………………………．35 致谢…………………………．．：……………………………．．……………．47 个人简历……………………．．………．………………～…………………．48 中文摘要 36个氨基酸多肽片段对ConA诱导的急性肝损伤的 保护性作用及机制研究 摘 要 目的：肝病是一类较常见的严重影响人类健康的疾病，若肝损伤长期 得不到及时有效的治疗，最终会进展为肝癌或肝衰竭，显著降低病人生存 质量并直接威胁生命。虽然不同的肝病发生机制各不相同，但有研究表明 免疫系统在大多数发病过程中起着关键作用。伴刀豆蛋白A(ConA)诱导 的急性肝损伤模型是一个较理想的T细胞介导的肝炎小鼠模型，用来模 拟人病毒性和自身免疫性肝病。 36个氨基酸多肽片段是本室前期在寻找早期肝炎临床诊断的生物标 志物时运用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI—TOFMS) 从慢性肝炎病人血清中检测到的一个含量较高的多肽。经初步研究发现该 多肽高表达可改变体外培养的HepG2细胞的增殖周期，促进细胞进入S 期。 迄今为止，还没有关于该多肽在肝炎动物模型中生理和病理作用的研 究，我们推测其可能在肝炎的进展过程中发挥作用，故进行本研究。本研 究利用ConA诱导小鼠急性肝损伤模型研究该36个氨基酸多肽片段在免 疫诱导的肝损伤中的作用，并初步探讨其作用机制，为下一步临床肝病治 疗提供实验依据。 方法： 1预防性给予小鼠人工合成的36个氨基酸多肽片段或地塞米松，一 酸氨基转移酶(脚)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平，肝组织进行 石蜡包埋并作HE染色，观察该多肽预防性给药对ConA诱导肝损伤的影 响。 2预防性给予小鼠人工合成的36个氨基酸多肽片段或地塞米松，一 小时后给予致死剂量ConA，观察各组小鼠72小时内的死亡情况，进行 生存分析，进一步确定该多肽片段对ConA诱导肝损伤的保护性作用。 3流式细胞术(FCM)检测各组小鼠肝细胞凋亡及有丝分裂情况，从 中文摘要 肝细胞角度探讨该多肽片段在ConA诱导肝损伤过程中的作用机制。． 4 胞)浸润情况，探讨该多肽片段在ConA诱导肝损伤免疫应答方面的作用 机制。 5通过尾静脉注射ConA诱导肝损伤，O．5小时后给予36个氨基酸多 平，肝组织进行石蜡包埋并作髓染色，观察其对ConA诱导肝炎的治疗 作用。此外，用致死剂量ConA处理小鼠后，用多肽片段或地塞米松治疗， 观察其72小时内的死亡情况，做生存分析，进一步确定该多肽片段对Con A所致肝损伤的治疗效果。 结果： 1 36个氨基酸多肽片段预防性给药对ConA诱导的肝损伤的影响 与模型组相比，各多肽片段及地塞米松预防性给药组均显著降低血清 典型肝坏死表现及淋巴细胞浸润；多肽片段75肛g／kg组肝细胞坏死明显减 见肝细胞坏死区域。 236个氨基酸多肽片段预防性给药对致死剂量ConA导致的小鼠生 存情况的影响 多肽片段和地塞米松预