Akt磷酸化对细胞自噬的调节及其真菌次级代谢产物C77影响细胞自噬和HBV复制.pdfVIP

中文摘要 Akt磷酸化对细胞自噬的调节及真菌次级代谢产物C77影响 细胞自噬和HBV复制 ～甥嘲 中文摘要 knaSe Akt是一种丝氨酸／苏氨酸激酶，又称蛋白激酶B(ProteinB，PKB)， 它位于mTOR的上游，在自噬调控中通常认为起负调控作用。而细胞自噬 (Autophagy)是真核生物用于清除胞内聚集物、损伤细胞器而维持其稳态平衡 的一种溶酶体降解途径。细胞自噬不仅在细胞生长发育、成熟分化等过程中起重 要作用，且与多种疾病发生、病毒感染与免疫等密切相关。我们用电镜、激光共 聚焦显微镜、免疫印迹检测发现稳定表达HBV基因组的HepG2．215细胞自噬较 HepG2细胞显著增强，说明HBV感染能够增强细胞基础自噬，同时发现在 体减少，LC3脂酰化降低。通过进一步的研究发现，API一2引起的自噬降低是通 号通路在细胞自噬中的理论研究。 Bvim，HBV)感染是严重危害我国人口健康的常见传染 乙肝病毒(Hepatitis 病之一。统计显示，目前我国HBV感染者达1．2亿。由于长期的病毒感染，病 情反复发作，使得肝功能受损，有很多病人最终会发展成肝细胞癌。目前，无论 对乙肝病毒感染者还是肝癌病人均需要更有效的治疗手段，因此对其病因学以及 新的治疗手段的研究显得尤为重要。化合物Gliocladicillin C(C77)是分离的 Gliocladium 该类化合物能抑制肿瘤细胞增殖，对细菌、病毒等病原体有杀伤作用。我们发现 该类化合物早期能引起细胞自噬，而自噬又是HBV复制所必须的。那C77是否 通过自噬对HBV复制产生一定影响呢?通过定量PCR检测表明C77是通过降 低自噬基因的表达来抑制HBV-X基因的转录量，从而影响HBV复制。 Akt促进细胞自噬而自噬又与HBV复制关系密切，那Akt是否与HBV复制 Akt磷酸化对细胞自噬的调节及真菌次级代谢产物C77影响细胞自噬和HBV复制 有关系昵?我们用Akt抑制剂API．2发现既可以抑制HBV的复制，也可以降低 细胞自噬。激光共聚焦显微镜显示API．2可以减少HepG2．215自噬体的数量。敲 水平，抑制了病毒的复制。所以我们的实验结论：C77是通过降低白噬相关基因 表达来抑制病毒复制的。Akt信号是维持HepG2．215细胞高水平基础自噬自噬所 必须的，Akt促进HBV的复制是通过调节细胞自噬来实现的。 关键词：Akt；细胞自噬；C77；乙肝病毒 II Abstract Akt andtheC77of Phosphorylation regulateautophagy metabolites affect and fungisecondary HBV autophagy l● ·● replication Abstract Aktisaserine／threonine isalso kinase，Whichcalled kinase proteinB(PKB)，It islocatedin the ofmTOR．Itisoftenass