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2015-10-08 发布于重庆
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实验十一Feulgen及PAS反应

* 实验十一核酸的显示方法——Feulgen反应糖类的显示方法——PAS反应实验目的与要求掌握Feulgen反应的基本原理掌握PAS反应的基本原理熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能一、实验的基本原理细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ?原理：利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。 Feulgen反应的基本原理：稀HCl水解DNA，破坏嘌呤和脱氧核糖间的配糖键，并在脱氧核糖C1端形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有DNA的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。 PAS反应的基本原理：利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。二、试剂与器材青蛙、鸭子剪刀、载玻片、盖玻片、吸管、甲醇、1 mol/L 盐酸、Schiff试剂、亚硫酸盐溶液、1%亮绿水溶液、1%过碘酸、苏木精、甘油/PBS封片剂普通光学显微镜核酸的显示——Feulgen反应取鸭血，血涂片，室温凉干，甲醇室温固定5 min，凉干; 蒸馏水过一下； 1 mol/L 盐酸(600C )水解8-10 min; 1 mol/L 盐酸（室温）1 min; 蒸馏水稍洗；置Schiff试剂中室温染色1小时左右；亚硫酸盐溶液洗3次，总时间为6 min; 自来水流水冲洗5 min，蒸馏水过一下；用1%亮绿水溶液复染5-10秒；自来水流水冲洗2 min; 蒸馏水稍洗；甘油/PBS封片剂封片；显微镜观察。三、实验步骤 *