激光诱导荧光检测器──一种高灵敏度的高效液相色谱和毛细管电泳检测器.pdfVIP

知识介绍 激光诱导荧光检测器— 一种高灵敏 度的高效液相色谱和毛细管电泳检测器* 马明生 韩慧婉 刘国诠 （中国科学院化学研究所 北京 100080） 与普通光源 比较，激光作为荧光检测器光源具 1 前言 有单色性好、聚光性能好等特点。其中最主要的是激 近年来，激光诱导荧光检测器 laserinduced 光作为相干光源具有较高的光子流量 photoflux， fluorescencedetector,LIF）作为一种高灵敏度的高 极大地增强了荧光检测的信噪比，有利于提高分析 效液相色谱和高效毛细管电泳检测器在测定生物体 检测的灵敏度。 中超痕量生物活性物质和环境有机污染物方面得到 激光器是激光诱导荧光检测器的重要组成部 了广泛的应用[15]。与其它现有的检测方式相比，激 分。激光器的选择主要有以下原则： 光诱导荧光检测器具有最高的检测灵敏度 表（ 1（激光发射波长必须与所分析组分的吸收光 1[40]。利用激光诱导荧光检测技术可对单细胞中的 谱相适合。对于复杂组分的样品往往很难找到一个 核酸进行定量测定[6]，对某些荧光效率较高的物质 适合所有组分的光源，然而，如果用同一荧光试剂对 甚至可达到单分子检测[7]。配有激光诱导荧光检测 所分析的组分进行衍生化处理，则只需选择与荧光 器的高效毛细管电泳与微透析探针技术结合可反映 试剂吸收相适合的激光波长即可对所有组分进行高 出几十微秒内动物大脑中神经递质等生理活性物质 灵敏度检测。VanDenBeld等[9]对常用荧光试剂及 的变化[8]，从而达到期望已久的动态生物化学检测 激发波长进行了较为详尽的评述。此外，在选择激光 的目的。本文结合我们的实际工作拟对激光诱导荧 器时还要考虑溶剂Raman散射的影响。水的Raman 光检测器的组成和结构设计进行介绍与评述。 散射谱带在 270.2 322.5nm 和606.06nm处，另外 两个较弱的谱带在454.5nm和609.7nm处。因此， 表1各种毛细管电泳检测器浓度检测灵敏度 可通过选择激光器的激发波长或荧光试剂使被测物 质的荧光发射避开水的Raman散射[1011。 2（）激光器要有良好的空间模式和空间指向性。 3（）激光器要有稳定的功率输出。激光输出功率 的稳定性直接影响检测器的灵敏度。输出功率越稳 定，检测器的噪声越小，而信噪比越高。 4（）选择适当功率的激光器。一般来讲，提高激 光激发功率，荧光信号和背景短噪声都会增强，但荧 光强度与激光照射功率成正比，背景短噪声则与激 2 激光诱导荧光检测器的组成 光照射功率的平方根成正比[10]。因此，从提高信噪 比的角度来讲，宜选择功率较大的激光器。另一方 激光诱导荧光检测器主要由光源 激（光器）、光 面，随着