DNA电极综述.docVIP

DNA电极修饰技术及其在 环境电化学中的应用研究 1 绪论 脱氧核糖核酸（DNA）是生命体的基因物质，在生物的生命过程中起着十分重要的作用。DNA承担着生命体的信息遗传，通过自我复制和表达来构建细胞内的生物蛋白和酶的生物合成。对DNA的分析在生物化学和分子生物学研究中有着极为重要的意义。自1953年Watson和Crick发现生物遗传分子脱氧核糖核酸的双螺旋结构以后，人们对于DNA的研究给予越来越多的关注，尤其是对于DNA与其他物质相互作用方面的研究。目前对DNA与其它小分子物质作用的技术主要有光谱技术、表面分析技术、凝胶电泳、微量热法、电化学技术等。其中电化学技术由于具有灵敏度高、所需药品量少、测试费用低和操作简单等特点而备受人们关注。 DNA修饰电极是用电化学技术研究DNA的一个重要途径，由于制备DNA修饰电极时，DNA的用量很少，并且所制成的DNA电化学传感器体积小、测试费用低、可微型化，使其在DNA研究中的应用范围扩大到传染病、流行病、肿瘤及遗传疾病等的临床检测、食品卫生检验、法医诊断、环境监控等方面。 1.1DNA修饰电极的制备 DNA修饰电极是将单链DNA(ssDNA)片段(长度一般为十几到几千个碱基不等)固定在电极表面形成DNA探针[1],这种ssDNA与目标DNA(靶基因)呈碱基序列互补,在适当的温度、离子强度、pH、缓冲溶液等杂交条件下电极表面探针ssDNA与溶液中的靶基因发生特异选择性杂交, 形成双链DNA(dsDNA) 从而导致电极表面结构的变化变化的情况可通过电极表面电活性指示剂所引起电信号(如电压、电流或电导)的变化体现出来进而可用于靶基因的定性定量分析。DNA修饰电极的制备主要分为以下四个步骤： （1）将ssDNA固定到固体电极（如玻碳电极、金电极、ITO等），形成DNA探针电极。 （2）在合适的杂交条件下，将DNA探针电极放入含有目标ssDNA的溶液中与靶基因杂交，形成dsDNA。 （3）选择合适的电化学指示剂（如道诺霉素等）完成dsDNA的表达。 （4）根据所选电化学指示剂的不同，选择相应的电化学方法完成电化学信号（如电流、电压）的测定。图1为采用杂交指示剂作为信号分子的核酸修饰电能广泛应用于细茵及病毒感染类疾病诊断、基因诊断、药物分析、DNA损伤研究和环境监测等领域。 1.2 DNA固定方法 1.2.1 吸附法 吸附法通常是通过非共价键作用将DNA 直接吸附到电极表面Brett[3]、Zhou[4]、庞代文[5, 6]等先后利用这一方法将单链DNA固定在石墨电极、玻碳电极、金电极和汞电极表面，制成DNA修饰电极。因为DNA分子中的磷酸骨架带负电荷，可以将预处理好的电极浸入含一定浓度DNA的溶液中，对工作电极施加一定正电位，将DNA吸附到工作电极表面。Wang[7~11]、Erdem[12]和Marrazza[1314]等在恒电位吸附法方面做了大量工作。利用DNA带负电荷的磷酸骨架和带正电的固体基体之间的静电作用也可固定DNA。[15]、周家宏[16]等分别利用带正电荷的聚吡咯、阳离子聚合物壳聚糖和聚赖氨酸将ssDNA固定于玻碳电极表面上，提高了DNA在电极上的固定量。采用吸附法在固定DNA前一般不需要对DNA进行衍生化处理，操作简单、便捷，但DNA探针再生较难。 1.2.2 自组装膜法 陆琪[18] 等人采用先进行-SH化合物自组装得到自组装单分子层再在其上共价键合或吸附固定DNA 的方法制备DNA 修饰电极克服了由于-SH修饰的DNA 难以合成，并且需要分离提纯操作繁琐的缺点。Maeda等[]利用DNA 的5’末端的磷酸基与2-羟基乙基二硫化物(HEDS) 的羟基可反应生成磷酸酯键用凝胶柱将反应混合物进行分离得到纯的5’端修饰的dsDNA。再用HS-将修饰过的dsDNA 固定到金电极表面从而得到DNA修饰金电极。自组装膜法制得的DNA修饰电极其表面高度有序、稳定性高，提高了DNA的杂交效率。但采用此法固定DNA要求DNA纯度较高，且分离操作复杂，并会造成一定的非特异性吸附。庞代文[9]研究了不同基团末端自组装固定DNA。结果表明，羟基末端、氨基末端和羧基末端中通过羟基末端自组装固定DNA量最高，达82.8-87.6%。 1.2.3 生物亲和反应固定法 1.2.4 共价键合法 共价键合法是通过在电极表面引入酰胺键、酯键、醚健等基团使DNA与这些活性基团形成共价键从而固定到电极表面上。或者将核酸衍生，使其带上合适的功能团，用双官能团试剂或偶联活化剂使固体基质与核酸末端之间通过化学键结合起来，从而成功固定DNA。如在氧化的玻碳电极表面, 以一种水溶液的乙基-(3-二甲基丙基) 碳二亚胺盐酸和N- 羟基磺基琥珀酰亚胺作为偶联活化剂, 小牛胸腺DNA 和多聚脱氧鸟苷酸、多聚脱氧胞苷酸片段通过与活化