HPLC法测定胆酸HPβCD包合物中胆酸的含量.pdfVIP

HPLC 法测定胆酸-HP-β-CD 包合物中胆酸的含量 苏柘僮，许润春，杨明 成都中医药大学，成都（610075 ） E-mail ：shayugege@ 摘 要：目的建立胆酸－HP －β－CD 包合物中胆酸的含量测定方法，为胆酸－HP －β－CD 包合物的制备工艺参数优化试验提供含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法： Welchrom-C18 色谱柱(5µm ，4.6×250mm)；流动相为乙腈：水：磷酸（60：40：0.06 ）；流 速 1.0ml/min；柱温40 ℃；检测波长192nm。结果 胆酸在 1 ～0.0625mg/ml 范围内线性关系 良好（r ＝0.999 ）；平均回收率为99.33 ％，RSD 为0.66%。结论 该方法简便，准确，重复 性好，适宜作为胆酸－HP －β－CD 包合物中胆酸的含量测定方法。 关键词：胆酸－HP －β－CD 包合物；胆酸；HP －β－CD；高效液相色谱法 胆酸(Cholic acid，CA)具有解热、抗炎、抗过敏、抗病毒等作用。临床多用于治疗热病 神昏、中风痰迷、咽喉肿痛、口舌生疮等[1] 。胆酸类物质凭其良好的抗炎作用，在治疗鼻炎 的口服制剂中得到了较广泛的应用，但是因为胆酸类物质对鼻粘膜有一定刺激性，不适宜于 鼻腔给药，这限制了其临床应用。胆酸－HP －β－CD包合物是以HP －β－CD(羟丙基－β－ 环糊精) 的水溶液和胆酸的乙醇溶液在一定条件下通过搅拌包合法制备而得，HP －β－CD可 以降低药物刺激性，通过包合可以降低胆酸对鼻粘膜的刺激性，为胆酸在鼻腔给药制剂中的 应用提供了一条途径。为了进一步考察胆酸－HP －β－CD包合物的最佳制备工艺参数，本 文对测定胆酸－HP －β－CD包合物中胆酸含量方法进行了研究。胆酸的含量测定方法很多， 有紫外分光光度法，薄层扫描法，HPLC和HPLC ／ELSD法等。其中紫外分光光度法，薄层 扫描法误差较大[2] 。本文通过对HPLC法测定胆酸－HP －β－CD包合物中胆酸的含量方法的 研究，得到了稳定性好，精密度高，重现性良好，回收率高的胆酸－HP －β－CD包合物中 胆酸的含量方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器 岛津系列高效色谱仪: 输液泵（LC-10ATvp ） 紫外检测器（SPD-10Avp） 柱温箱（CT-10ASvp ） 高效液相色谱工作站： 浙江智达N2000 1.2 试药 胆酸－HP －β－CD包合物溶液（自制）；胆酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号 100078－200414 ）；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸水。 2 方法与结果[3] 2.1 色谱条件 色谱柱：Welchrom-C18 色谱柱（5µm，4.6×250mm ） 流动相：乙腈：水：磷酸（60：40 ：0.06 ） 流速：1ml/min - 1 - 柱温：40 ℃ 检测波长：192nm 进样量：10µl 理论塔板数按照胆酸峰计算，不得低于8000。胆酸对照品色谱峰保留时间约为5.2min， RS 大于1.5。 2.2 对照品溶液制备 精密称取胆酸对照品适量，溶于60 ％乙腈溶液，制成每1ml 含胆酸1mg 的溶液，即得。 2.3 供试品溶液制备 精密吸取胆酸－HP －β－CD 包合物溶液4ml ，置于10ml 容量瓶中，加入适量乙腈，超 声处理20min ，用乙腈定容，摇匀，用0.45µm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2.4 空白试验 称取HP －β－CD适量，溶于60 ％乙腈溶液，制得空白溶液。精密吸取空白溶液10µl，按 上述色谱条件进样测定，结果空白溶液与胆酸对照品在相同保留时间处未显色谱峰，故认为 无干扰。 图1HP －β－CD Fig1 HP －β－CD 图2 胆酸对照品