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壳聚糖与DNA 的作用及胺基对抑菌性能的影响 1，2 1 1* 2* 李小芳 ，冯小强 ，杨声 ，苏中兴 1 天水师范学院生命科学与化学学院，甘肃天水（741001 ） 2 兰州大学化学化工学院，甘肃兰州（730030 ） E-mail: zxsu@，ysh@ 摘 要：采用抑菌圈法研究了壳聚糖对大肠杆菌(E .coli)和金黄色葡萄球菌(St. aureus)的抑菌 活性，并运用紫外吸收光谱和电化学的方法，研究了壳聚糖与DNA的相互作用,初步提出了 壳聚糖对E. coli和St. aureus的抑菌机理。同时，利用壳聚糖的席夫碱反应，对壳聚糖的胺基 进行保护后，研究了壳聚糖中的胺基对其抑菌性能的影响。研究结果表明，壳聚糖对E. coli 和St. aureus具有很好的抑制作用，且抑菌活性与其胺基有关；壳聚糖能与细胞内带负电的核 酸结合，使细胞正常的DNA复制生理功能受到影响，抑制细菌的繁殖，从而达到抑菌的目 的。 关键词：壳聚糖；抑菌活性；希夫碱；胺基；DNA 中图分类号：Q937 1. 引 言 Chitosan)是甲壳素脱乙酰化的产物,即脱乙酰基甲壳素,学名聚氨基葡萄糖,又名可溶性 甲壳质、甲壳胺。化学名称为(1，4)聚-2-氨基2-脱氧-β-D-葡聚糖,是由N-乙酰-D-氨基葡萄糖 单体通过β-1, 4-糖苷键连接起来的来源丰富、无毒、可吸收降解的直链状高分子化合物.分子 结构如下: 壳聚糖及其衍生物具有广谱的抗菌性能,它可抑制多种细菌和真菌等的生长[1-5] 。近年 来，人们对壳聚糖的抑菌机理的认识已有了长远的发展。但是，就其确切的抑菌机理目前尚 不清楚，可以是众说纷纭.Young等认为壳聚糖可吸附于细菌表面,与细菌细胞膜作用而改变 其通透性[6] ；Helander等提出, 壳聚糖对革兰氏阴性菌的抑菌作用是由于细胞外膜被破坏,最 [7] [8] 终造成菌体死亡 ；Hadwiger提出以细菌分子中DNA为作用靶向的抗菌机理 ；Tokura等认 为壳聚糖吸附细菌后,壳聚糖分子包埋了整个细胞,抑制了细菌的呼吸和营养物质的进入而导 致细菌死亡[9] ；Papineu等研究认为壳聚糖的抑菌作用,可能是由于它导致了细胞内物质的泄 漏而引起的[10] 。普遍认为壳聚糖的抑菌机理存在以下几种可能：(1)壳聚糖干扰菌体细胞膜 的功能，从而达到抑菌的效果;(2)壳聚糖直接与菌体的DNA和mRNA作用；(3)壳聚糖激活几 丁质酶，达到抑菌的目的；(4)壳聚糖中的胺基在起抑菌作用；(5)壳聚糖与细胞质发生作用。 其中壳聚糖对细菌DNA 的作用是基于其抗菌机理研究的推论.有一种推论认为带有正电的低 分子量壳聚糖进入到细菌细胞内部,与带有负电的DNA作用,干扰其复制,或阻碍mRNA 的合 成。刘晓非等[11]用激光共焦显微镜对异硫氰酸荧光素(FITC)标记的低分子量壳聚糖 (Mw≤8000)与大肠杆菌作用的观察,发现具有抗菌性的壳聚糖齐聚物进入到了细菌细胞的内 部，认为壳聚糖和O-羧甲基壳聚糖均可以有效阻碍mRNA 的复制,且O-羧甲基壳聚糖在同等 条件下影响作用较大,推测是由于此种衍生物对氨基的质子化能力较大和体积庞大造成，壳 - 1 - 聚糖和O-羧甲基壳聚糖不仅可以和DNA结合而使之不能转化, 而且可以直接阻碍正常质粒 [12] DNA 向大肠杆菌的转化过程 。 一般认为壳聚糖的抑菌性能主要由-NH2 引起的。本研究运用紫外吸收光谱和电化学分 析的方法，研究了壳聚糖与DNA 的相互作用,初步提出了壳聚糖对E. coli和St. aureus的抑菌机 理。利用壳聚糖上的胺基与醛（或酮）发生Schiff碱反应生成相应的醛（或酮