重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作.pdfVIP

中国试剂网 3.10.1.46 重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 （细菌内同源重组AdEasy System ） 中国试剂网 3.10.1.46 一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV 质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入 pshuttl-CMV 质粒多 克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4. 用PmeI 单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。 5. 胶回收线性化质粒，以备共转化使用。 二 共转化 1 大肠杆菌BJ5183 电转感受态制备 ² 从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183 细菌，接种于LB 培养基中，37℃振摇过 夜。 ² 接种25ml 过夜培养物于500ml LB 培养基，37℃振摇，至OD600 达到0.4 。 ² 迅速将培养物置于