胰蛋白酶抑制剂的测定. NY.docVIP

NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1103.2－2006 转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定 Safety assessment of genetically modified plant and derived products Part 2: assay of anti-nutrients pancreatic typsin inhibiter 2006-07-10发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T1103.2－2006 前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。 本标准主要起草人：杨月欣、王竹、韩军花、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。 本标准首次发布。 NY/T1103.2－2006 转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定 1 范围 本标准规定了转基因植物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定方法。 本标准适用于转基因大豆及其产品、转基因谷物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定modified plant 指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的植物。 2.2 转基因植物产品 products derived from genetically modified plant 指转基因植物的直接加工产品和含有转基因植物的产品。 3 原理 胰蛋白酶苯甲酰L-精氨酸（BAA）410 nm下有最大吸收值。转基因植物及其产品中的胰蛋白酶抑制剂可抑制这一反应，三羟甲基氨基甲烷0.05 mol/L Tris缓冲液：称取6.05和2.94CaCl2·2H2O）溶于00 mL水中，调pH值至8.2，。 0.01 mol/L氢氧化钠溶液：称戍烷已烷胰蛋白酶 －苯甲酰L-精氨酸N -benzoyl-L-arginine ethyl ester）。BAEE u（BAEE 单位）表示胰蛋白酶与BAEE在25 C、pH 7.6、体积3.2 mL条件下反应，在253 nm波长下每分钟引起吸光度值升高0.001，即为1个BAEE u。 5.7 胰蛋白酶溶液mg胰蛋白酶溶于200 mL 1mol/L 盐酸中。 苯甲酰L-精氨酸（benzoyl-DL-arginine p-nitroanilideBAPA） BAPA底物溶液称取40 mg BAPA1 mL二甲亚砜，用℃的Tris缓冲液稀释至100 mL。BAPA底物溶液实验当日配制。反应终止液取30 mL冰乙酸0 mL。 实验室设备。 恒温水浴箱。 分光光度计。 旋涡搅拌器。 电磁搅拌器。 的制备 将磨碎，过筛筛盘100－200目。称取，50 mL 0.01 mol/L 氢氧化钠溶液，pH值应在8.410.0之间低档速电磁搅拌下浸提3小时，浸出液用于测定必要时进行稀释。 如果全脂大豆粗粉豆粉，应在室温条件下用戍烷已烷脱脂。戍烷已烷低档速电磁搅拌痔疮偏方残渣用约50 ml戍烷已烷浸提37℃水浴中混合加入5mL预热37℃的BAPA底物溶液，37℃水浴10 min，加入1mL反应终止液。滤，0.3 0.6 1.0 1.5 水 2.0 1.7 1.4 1.0 0.5 胰蛋白酶溶液 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 反应终止液410 nm波长测定值在规定实验条件下，每10 mL反应混合液在410nm波长0.01吸光度值即为一个在规定实验条件下，与相比，胰蛋白酶抑制剂单位（TIU）在规定实验条件下，与相比，每10 mL反应混合液在410 nm波长降低0.01为一个AN － 非抑管吸光度值； AT － 测定管吸光度值； AT0 － 试样对照管吸光度值。 8.2.2 只有胰蛋白酶抑制率在20－70%范围内时，测定管吸光度值可用于胰蛋白酶抑制剂活性计算，各测定管胰蛋白酶抑制剂活性按式（2）计算。 TI …………………………………（2） 式中： AN、AT、A T0 同式（1）； TI － 胰蛋白酶抑制剂活性，单位为胰蛋白酶抑制剂单位以测定用体积为横坐标，TI为纵坐标作图，毛孔大怎么办，斜率值即是单位体积试样浸出液不是一条直线关系时， ……… TIM ………………………………… （3） 式中： TIM － 试样中胰蛋白抑制剂活性，单位为胰蛋白酶抑制剂单位胰蛋白酶抑制剂单位 重复条件下岳阳家政，两次独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的10％。 AN－AT －A T0 t ×0. 01 _____________________________________________________ 0.0