高载酶量酶／酶免疫电极的制备及其电化学机理研究.pdfVIP

维普资讯 17 g gg4期 井_ SclENcE A2u00g1．年2800月1 ． No_ v0ll7 4 J0uRNA1J 文章编号 ：1006—6144(2001)04—0283—05 高载酶量酶 ／酶免疫电极的制备及其电化学机理研究 董飒英 钱建华 (725研究所青岛分部 ，青 岛，266071) 吕呜祥 田波叉 (天津大学化工学院，天津 ，300072) 罗 国安 (清华大学化学系，北京，100084) 摘 要 ：本文利用扫描 电镜和电化学方法确定了最佳镀铂电位，井进一步研究了酶电 极和酶免疫电极在基体 电极镀铂和未镀铂条件下的米氏常数 、电化学反应速率常数 和反应速度控制步骤 。比较分析 了生轴 电极的最佳实验条件。 关键词 ：酶电极；酶免疫电极 ；镀铂 电位；米氏常数；速度控制步骤 中圈分类号 ：0657．15 文献标识码：A 肠毒素 (sE)的检测不仅有临床意义 “]，而且有重要的军事应用价值0。目前检测 SE的方法有固相 放射免疫测定法、酶免疫吸附法、基因探针法等[ ，这些方法虽都有很高的检测灵敏度，但也存在操作 复杂、耗时较长 、投资大、成本高等问题。与其它方法相比，电化学生物传感器具有成本低、体积小、响应 速度快、检测灵敏度高、过程稳定 的优点。 本文利用酶 电极与免疫 电极 的工作原理 ，研制用于检测样品中金黄色葡萄球菌肠毒素C-(SEC)含 量的生物 电化学传感器来取代上述较繁琐的检测方法。这种方法具体的调制机理如文献 所述 。它克服 了竞争法和夹心法 中酶标抗原或抗体制备复杂 的缺点，利用免疫反应对酶催化括性的调制作用及舟体 电极响应电流的变化来达到检测抗原的 目的。我们 已用它对人绒毛膜促性腺激素 (HCG)进行了检褪I， 取得了良好的效果 。提高电极表面载酶量是制备这一生物传感器的关键技术 ，电极表面 电镀铂黑又 是解决这一 问题 的主要方法 。电镀铂黑后电化学反应动力学过程是否发生变化?本文对此进行 了较为 详细 的测试和分析 。 1 实验部分 1．1 化学试剂 葡萄糖氧化酶 (GOD)是 Sigma化学公 司产品，肠毒素抗原抗体购于中国人民解放军军事 医学科学 院，所有试剂均为分析纯。 1．2 电极的制备 1．2．1 电极预处理 将嵌人聚四氟乙烯管中的玻碳电极 (中50mm)分别经 1#、2#、3#金相砂纸打 磨 ，用温 AIO 抛光粉抛光后 ，再用酒精棉擦试电极表面，然后在超声波清洗池中清洗，即得符台莪们要 求的干净 电极 。在一 50mV、一150mV、一250mV，一350mV(vs．Ag／AgCI)恒 定 电位 下于1 的 收稿 日期 200102l2 通讯联系人；董飒英 283 维普资讯 第4期 董最羹等：高栽醇量醇 ／醇免疫电枫的制备厦善电化学机理研究 第 l7车 H2PtCI¨0．6g／L的Pb(Ac)和 0．1mo[／LNaCI混台电镀液中将干净的玻碳 电极镀铂 30rain，取出漂 洗 ，即得各电位下的镀铂玻碳 电极。 1．2．2 酶电极的制备 在 一250mV 的恒定电位下 ，镀铂。取 0．05mL3OU 的葡萄糖氧化酶滴在镀铂 的或光滑 的玻碳电极上，放人冰箱 中，待凉干后 ，再滴上一滴 2．5 的戊二醛，再放人冰箱，凉干后 ，取 出，用蒸馏水漂洗，擦净残液 。 1．2．3 SECt酶免疫 电极的制备 将在 1