J2 Scientific GPC凝胶渗透色谱操作指导.docVIP

J2 Scientific GPC凝胶渗透色谱操作指南 应用部分 在您阅读本指南之前，最好先熟悉仪器的操作，并已经掌握软件中文操作手册中的内容。本指南旨在帮助新用户掌握仪器的维护，方法建立及简单的故障排除，北京绿绵巨贸科贸有限公司对此指南保留全部权力，任何未经允许的复制、转载及其他以赢利为目的的商业行为均构成对本公司的侵权。 凝胶渗透色谱原理简介 Accuprep系统结构及工作框图 注意事项 如何建立适合我的应用的方法 GPC柱的维护和重新装填 如何备份数据 常见故障分析 凝胶渗透色谱原理简介 凝胶渗透色谱，简称GPC，是一项比较传统的分离技术，GPC的柱子由化学惰性的中空小球组成，利用空间排阻的原理对样品进行分离，详见下图： 由于小分子化合物会从填料的孔中穿过，而大分子从填料周围的空间穿过，会造成小分子与大分子之间的行程差距，这样大分子与小分子会先后从柱中馏出，起到分离的作用。由于这一分离技术不受样品极性的影响，所以对于色谱用户来说，是一种非常有效解决色谱柱不能分开的样品的手段，尤其是对于脂肪类，蛋白及色素类大分子干扰物，这些物质对于色谱柱，进样口来说非常危险，而在生物源样品当中的含量一般又比较高，那么在进行样品分析之前进行一步GPC净化就显得非常必要了。 Accuprep系统结构及工作框图 Accuprerp TM是由美国J2 Scientific公司生产的凝胶渗透样品净化系统，早在上世纪80年代就引入中国，目前其产品型号主要有手动AccuPrepJr和自动AccuPrep两种，在2005年该公司又推出了新型的Accuprerp TM　MPS系统，体积进一步小型化，并能整合计算机及在线浓缩，SPE等多种技术，更加趋于成熟。由于目前大家采购这一仪器主要是为了提高效率，本指南将重点放在对自动仪器的介绍方面。 一台完整的GPC系统包括几个部分：触摸屏，控制模块，输送泵，检测器，自动进样器和软件部分。 让我们先来认识一下仪器各部分： 工作框图：详见附录1。 注意事项： 样品在进样前必须经0.45u的微孔膜过滤。 含水量大的样品在进样前须脱水。 对于快速柱来说，脂肪耐受力为0.5克；传统柱为1克，那么在进样前请以此为根据来计算取样量。例如某种样品的脂肪含量为20%，那么称样量请不要大于2.5克。 在完成前面的样品处理后，如液液萃取，要将样品体系转换成GPC所用的流动相，一般来说除石油醚外，其它基质如丙酮，必须进行这样的转换。而如果采用乙酸乙酯这类与水互溶的溶剂进行萃取，最好过无水硫酸钠脱水。如果样品溶剂无法进行转换，那么不同的溶剂总量不得大于进样量的10%。 GPC柱要求流动相与柱子规格一致，请不要随意变更流动相的比例及组成。 系统主要采用尼龙接头，在连接时适当拧紧即可，过度用力会造成螺纹损坏。 PTFE的连接管比较脆，不可折成死弯，并在移动仪器时小心。 严禁使用酸，碱性流动相，严禁使用水做为流动相，严禁使用缓冲盐。 流动相最好每次配制的量够用，如果放置时间过长，最好重新配制。对于乙酸乙酯来说长时间放置会吸收水分，二氯甲烷见光分解后会产生盐酸，这些都非常不利于GPC分析。 如果有其它不明事项，请咨询我公司工程师，请勿自行尝试。 如何建立适用于自己的分析方法 针对一般的农药/兽药残留分析来说，样品基质中的大分子干扰物主要为色素，脂肪及蛋白，多糖等生物源的干扰物。这类物质对于后面的色谱分析来说，是非常令人讨厌的，不但会带来噪音高，杂峰多，而且会污染色谱的进样口，离子源，并对色谱柱的寿命也会有很大影响。虽然还有其它方法进行净化，例如氧化铝柱，酸性硅胶柱等，但这类方法多数会对　待测样品有不同程度对的吸咐，会引起回收率的问题。 根据凝胶渗透色谱的原理，大分子干扰物会率先从柱子中流出，随后是小分子的目标化合物，那么对于一个GPC的方法来说，关键在于找出什么时间收集，什么时间停止收集。为了说明如何找到准确的收集时间，我们以50%乙酸乙酯/50%环已烷的GCP色谱柱对溴氢菊酯净化为例： 移取2ml，100ppm的溴氢菊酯标准品（请用1：1乙酸乙酯：环已烷配制）到样品瓶，并加入1ml色拉油最后定容至10ml,做为我们的待分析样品。 在软件中，编辑方法default.met,对于快速柱来说，第一个馏分设定30分钟不选择收集流速设定为4.7ml/min,　2到5馏分都不进行设定选择记录检测器数据选择合适的柱子保存方法即可。 编辑样品序列，待序列运行完毕后进入accuchrome,导入数据，根据标样的峰来设定收集时间，为了保证回收率，一般来说会让收集时间段略宽于峰宽。 随后我们再回到Accuprep软件，新建一个方法，注意这里的时间不是保留时间，而是一个时间段，比如我们刚才运行的谱图中溴氢菊酯的出峰时间为10分钟到12.5分钟，则