实验十一 土壤微生物的分离纯化以及鉴定.pptVIP

实验十一 ??? 土壤微生物的分离纯化以及鉴定 一 目的要求 1.学习从土壤中分离纯化微生物的基术操作技术。 2.掌握样品稀释的方法和稀释倒平板等几种常用的分离纯化微生物的方法。 3.掌握荚膜染色法，学习圆褐固氮菌的分离和鉴定。 二 基本原理 土壤中有大量混杂的微生物，以土壤作为菌源，通过稀释分离，使其分散成单个存在的菌体、芽孢或孢子，以便在固体平板上经过培养，长成肉眼可见的并具有一定特征的菌落，经鉴定或进一步纯化，即可转入相应的培养基或纯培养。 二 基本原理 三 器材与试剂 培养基： 无N培养基 仪器和其他用具： 微量移液器 染料等 四 操作步骤 稀释倒平板法分离圆褐固氮菌： 1.采土壤：取表层以下5-10cm处的菜园土。 2.制备土壤悬液：称土样5g→45ml无菌水（带玻璃珠）→振荡5-10分种，即成10-1的土壤悬液。 3.10倍稀释：10-1的土壤悬液取1ml→放到9ml无菌水稀释管中，即成10-2的稀释液，10-2取1ml→放到9ml无菌水稀释管中，即成10-3的稀释液。 四 操作步骤 4.稀释倒平板：取10-2、10-3两管稀释液各1ml，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿，然后，每个平皿分别倒入约15ml已融化并冷至50℃左右的蔡氏培养基，轻轻摇匀，凝固后即成霉菌平板。 5.培养： 28～30℃，倒置培养3-4天。 四 操作步骤 种土法分离圆褐固氮菌： 用灭菌镊子取火柴头大小（绿豆般大小）的土粒，接种于无氮培养基平板表面， 28～30℃，倒置培养3-4天。 荚膜的染色： 挑取圆褐固氮菌的可疑菌落进行菌涂片，进行荚膜染色。 单染法：菌体紫色、荚膜浅色或无色。 ? 四 操作步骤 荚膜 四 操作步骤 染色后的荚膜 五 结果与讨论 1.绘图 绘出圆褐固氮菌的形态图。 2.思考题 （1）稀释倒平板法分离微生物时应注意什么问题？吸取菌悬液时为什么要从低浓度到高浓度？ （2）平板培养时，为什么要倒置培养？