通过IFn-γ抑制胆囊癌血管生成机制的实验的研究.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………．1 英文论著摘要……………………………………………．5 二、英文缩略语……………………………………………．．10 三、论文 l1 前言…………………………………………………．．1 日IJ吾…………………………………………………．．1 材料和方法……………………………………………．．12 实验结果………………………………………………．18 讨论…………………………………………………．．22 结论…………………………………………………．．23 四、本研究创新性的自我评价…………………………………．．24 五、参考文献………………………………………………．25 六、附录 综述…………………………………………………．．27 在学期间科研成绩………………………………………．．39 致谢…………………………………………………．．40 个人简介………………………………………………．41 ·中文论著摘要· 通过IFN-Y抑制胆囊癌血管生成机制的实验研究 盏耆 莉葺 胆囊癌是胆道系统中常见的恶性肿瘤，症状隐匿，早期难以发现，晚期常有 周围组织、血管神经的浸润和淋巴结转移，根治性手术切除率低，对放疗及化疗 均不敏感，严重危害人类健康。如何有效抑制胆囊癌进展，是提高患者生存率的 重要手段。在胆囊癌的发生、发展过程中，血管发生被认为是最重要的促进因素 之一。血管内皮生长因子(vascular growthfactor，VEGF)在肿 epithelial 瘤血管发生中具有确切的重要作用。大量的研究证实，多种恶性肿瘤中都有VEGF 的高表达，且表达程度与肿瘤恶性程度呈正比，而在正常组织中则无或仅有低水 平表达。高水平的VEGF表达与胆囊癌的生长、局部浸润、肝转移和淋巴结转移 具有明显相关性。 肿瘤相关巨噬细胞(tumor～associated 的巨噬细胞，主要来源于外周血单核细胞，多位于肿瘤的基质部和血管周围。多 种肿瘤组织特别是上皮组织来源的肿瘤，包括肺、乳腺、胃的实体瘤内有大量的 TAM存在。活化的巨噬细胞作为抗原提呈细胞参与细胞免疫和体液免疫，起初作 为一种抗肿瘤的防御机制被我们所熟知。而近期大量研究证实，在多种恶性肿瘤 中，TAM并未发挥抗肿瘤作用，反而促进肿瘤的生长、侵袭和转移，目前将TAM 定义为分化不完全的M2型巨噬细胞，是M2型巨噬细胞的一种亚型。通过免疫组 织化学染色及微血管计数，研究人员发现TAM与肿瘤中VEGF和血管发生有关， 物学功能具有明显的可塑性，能被包括IFN-Y在内的多种细胞因子调控，其中 囊癌中VEGF的表达，从而抑制胆囊癌的血管发生尚未见报道。 本实验通过构建裸鼠皮下胆囊癌模型，并给予肿瘤内注射小鼠IFN-Y影响裸 鼠TAM的分化，分别计数TAM及单核一巨噬细胞，分析TAM的分化百分率；同时 检测移植瘤内VEGF的表达水平，并计数微血管密度(microvesseldensity，MVD)， 评价IFN-Y对TAM表型及功能的影响，以及胆囊癌血管发生情况。 材料与方法 一、 实验材料 盒；小鼠VEGFaELISA试剂盒。 二、实验方法 1、细胞培养 人胆囊癌细胞株GBC-SD培养于RPMI 培养面积后传代。 2、裸鼠皮下胆囊癌模型建立 收集对数生长期的GBC—SD细胞，台盼蓝染色检测细胞活性，并进行细胞计 1640完全培养基调整细胞悬液浓度为 数。当活性细胞达90％以上时，应用RPMI 平均直径超过2mm时判断为小鼠荷瘤成功。 3、肿瘤内注射小鼠重组IFN—Y 应用游标卡尺测量移植瘤长短径，平均直径超过5mm者满足注射条件，按随 机分组原则分为实验组和对照组，实验组给予肿瘤内注射小鼠重组IFN—Y溶液 射2