AE3蛋白在心肌细胞缺氧预处理的保护中作用.pdf

摘要 摘要 目的：以正常及稳定低表达AE3基因的大鼠心肌样细胞(H9c2)为研究对 象，建立缺氧预适应保护模型，研究AE3蛋白在缺氧预适应保护中的作用并初 步探讨其可能的作用机制。 方法：将大鼠心肌样细胞(H9c2)，均匀接种在六孔培养板上，随机分为五 个组：未转染正常对照(Contr01)组、稳定转染阴性对照质粒(阴性对照组， Non．silencing 表达AE3基因+缺氧预适应(RNAi+APC)组。检测以下指标t①细胞存活率； ④细胞凋亡的程度： ②H9c2中AE3mRNA的表达；③H9c2中AE3蛋白的表达； 含量； ⑧细胞中Cl‘含量 mRNA和蛋白表达水平 结果：H9c2经A／R处理后，细胞活力明显下降，AE3 升高，细胞凋亡的程度严重，ROS含量增加，SOD及GSH-Px的酶活性下降，细 mRNA和蛋白表达水平也明显升 APC处理后，细胞活力较A／R组明显升高，AE3 高，细胞凋亡的程度显著减轻，ROS含量减少，SOD及GSH．Px的酶活性上升， mRNA和蛋白表达水平也相应的明显下降，细胞凋亡的程度明显加重，ROS含量 具有显著性差异(刚．01)。而转入非特异shRNA组，以上相应的指标并没有特 异性变化，与Control组比较没有统计学差异(p0．05)。 结论： AE3蛋白介导心肌缺氧预适应保护作用来对抗缺氧复氧带来的心肌 损伤，机制可能为通过抑制胞内氯过载及减少细胞内ROS含量，进而抑制缺氧／复 氧所致的氧化应激、钙超载及细胞凋亡。 关键词：AE3蛋白；缺氧预处理；氯离子；H9c2细胞 国家自然科学基金委员会资助项目(NO30660209) II ABSTRACT ABSTRACT ofthis isto effectsofAE3 objeetive：Thepurpose study investigate protein andits mechanismsanoxia ofnormalandAE3 signal in preconditioning expression H9c2cells． down-regulated Methods：CulturedH9c2swereculturedina6．wellculture and plateuniformly were dividedintofive randomly groups，namely,Controlgroup，Non-silencing shRNA and Preconditioninggroup group，Anoxia／Reoxygenationgroup，Anoxia AE3 RNAi+Anoxia levelsof Preconditioningviability,expression group．Cell mRNAand