不同接骨方药对骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化、迁移影响实验研究.pdf

目 录 中文摘要1 英文摘要2 缩略词表3 前言4 一、立题依据5 1 不同接骨方药的研究进展5 1.1 七厘散研究进展5 1.2 桃红四物汤研究进展 6 2 骨髓间充质干细胞的研究进展7 2.1 来源及概况7 2.2 骨髓间充质干细胞的培养方法8 2.3 骨髓间充质干细胞的形态及增殖特点9 2.4 骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究进展9 2.5 BMSCs 在骨科相关疾病中的应用11 2.6 骨髓间充质干细胞在骨组织工程中的应用12 3 中药血清药理学研究进展 .. ... 13 3.1 中药血清药理学概念及研究背景 13 3.2 血清制备及存储的相关研究 14 3.3 含药血清在实验过程中的相关研究进展15 4 研究内容 16 5 拟解决的关键问题16 二、实验研究17 技术路线图 17 实验一 不同接骨方药含药血清的制备18 1 实验材料18 2 实验方法 18 实验二 骨髓间充质干细胞的体外分离与培养 ...18 1 实验材料18 2 实验方法 19 3 实验结果22 实验三 大鼠骨髓间充质干细胞表型鉴定24 1 实验材料24 2 实验方法24 3 实验结果24 实验四 不同接骨方药含药血清对 BMSCs 增殖、成骨分化的影响24 1 实验材料24 2 实验方法25 3 统计学方法26 4 实验结果26 三、讨论29 1 不同接骨方药含药血清对BMSCs 增殖及成骨分化的影响29 2 干细胞与祖国医学理论相关性研究30 四、结语33 1 结论33 2 存在的问题与展望33 参考文献 34 致谢 43 附录1 工作场景图及主要仪器 44 附录2骨髓间充质干细胞增殖及分化过程45 附录3实验动物质量合格证证46 附录4 动物实验设施使用 47 不同接骨方药对骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化、迁移影响的实验研究 中 文 摘 要 目的：研究不同接骨方药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化 的影响，初步探讨传统接骨方药治疗骨折的作用机理及其治疗骨折的有效成份。 方法：通过制备七厘散、桃红四物汤，依据 “人和动物体表面积折算的等效剂量比率 表”计算SD 大鼠灌胃剂量，以临床5 倍剂量给大鼠灌胃制备含药血清，灌服等体积生 理盐水制备的血清作为空白对照组血清。采用贴壁筛选法培养大鼠骨髓间充质干细胞， 以5%浓度含药血清干预第三代BMSCs，研究不同接骨方药对大鼠BMSCs 增殖及成骨分化 的影响。BMSCs 增殖情况通过MTT 法检测分析；成骨分化情况通过对BMSCs 成骨诱导后 第3、6、9、12 天测定细胞碱性磷酸酶 （alkaline phosphatase，ALP）活性、第6、11、 16 天测定钙盐沉积量、骨钙素分泌量以及Ⅰ型胶原，比较各组间差异，从而探讨不同接 骨方药含药血清对大鼠BMSCs 增殖及成骨分化的影响。 结果：不同接骨方药中七厘散促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化作用最为显著且 较桃红四物汤有意义，主要表现MTT 值、ALP 活性、钙盐沉积、骨钙素、Ⅰ型胶原等。 结论：1)不同接骨方药对骨髓间充质干细胞的增殖、成骨分化均有促进作用。 2)通过实验发现，不同接骨方药的代表药物中，七厘散促进骨髓间充质干细胞增殖 和向成骨细胞分化的作用较桃红四物汤强。 关键词：七厘散；桃红四物汤；含药血清；骨髓间充质干细胞；增殖；成骨性分化； 1 不同接骨方药对骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化、迁移影响的实验研究 ABSTRACT Objective: To study the effects of serums from rats fed with various Chinese herbal drugs on the proliferation and osteogenic differe