脾酪氨酸激酶（Syk）甲基化失活及结直肠癌关系和研究.pdf

中山大学博士论文 脾酪氨酸激酶(Syk)甲基化失活与结直肠癌关系的研究 脾酪氨酸激酶(Syk)甲基化失活与结直肠癌关系的研究 专业：外科学 申请人：杨祖立 导师：汪建平教授 中文摘要 【研究背景】 结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤，其发病率在国内为第四位，居癌症死因 的第三位。随着国人生活水平的提高，生活方式和饮食习惯的改变，其发病率有 逐年上升的趋势，而且发病年龄也趋向年轻化。结直肠癌的发生是一个多因素、 多基因、多过程综合作用的序贯过程，在这个发生过程中，既有遗传学方面的改 变，又有表观遗传学方面的改变。前者包括基因突变、缺失和杂合子丢失(如 P53，APC等)，后者包括基因的甲基化以及组蛋白的修饰(如MGMT，hMLHl 等)。结直肠癌病因的研究对于诊断、治疗、预防术后复发和预测术后生存具有 极其重要的意义。人们对于遗传学方面改变的研究，比较深入和广泛，而且有些 指标已经广泛应用于临床，如结直肠癌患者术后血清CEA水平升高或高于术前 水平，则高度怀疑术后复发。而表观遗传学方面的研究，则是近十几年来在肿瘤 发生机制方面新出现的研究热点，它不同于传统的遗传学改变，而是肿瘤发生的 two．hit 另一种机制，是对肿瘤发生假设理论“二次打击学说”(Knudson’S hypothesis)的补充。现有的研究结果表明，在大部分结直肠癌的发生、发展过程 中，既存在遗传学上的异常，又可存在表观遗传学的异常，基因表观遗传学的改 变，不仅协同遗传学的改变参与肿瘤的发生和发展，而且在某些情况下有可能是 肿瘤发生的唯一机制，为研究结直肠癌的发生、发展以及复发和预后提供了一条 新的途径、方法和生物学指标。 表观遗传学的改变包括基因的甲基化和组蛋白的修饰。前者是指在甲基化转 移酶(DNMTs)的作用下，将蛋氨酸的活性甲基转移到胞嘧啶的第五位碳原子上， 中山大学博士论文 脾醅氢酸激酶(Syk)甲基化失活与结直肠癌关系的研究 形成5．甲基胞嘧啶(5一mC)，真核生物中胞嘧啶的甲基化修饰主要发生在CpG 因的启动了区域，也可以出现存外显子和内含子中。甲基化昀发生既有年龄特异 性fA型)，又有肿瘤特异型(C犁)。在肿瘤特异性的甲基化中，既有抑癌基因 的甲基化，又有癌基因的甲基化。基因甲基化的研究主要集中在抑癌基因的研究 上，研究比较多的基凼有MGMT，P14，P16和hMLHl等，发生甲基化的抑癌基 因常常因为转录抑制而失去蛋白表达，对原癌基因的研究则较少。组蛋白的修饰 包括乙酰基化、甲基化、磷酸化和泛素化等，主要是组蛋白去乙酰基化和甲基化。 组蛋白乙酰化后染色体处于开放状态而利于转录，并上调基因的表达，而低乙酰 化则抑制或下调基因的表达。组蚩白甲基化的机制比较复杂，不l_J位点、不同氨 基酸和不同的甲基化模式决定组蛋白有不同的活性。基因甲基化和纽蛋白的修饰 是表观遗传学研究的两个重要方面，二者可以单独调节基因的表达，也可以共同 作用，相互影响，共同调节基因的表达，在大多数情况下，二者足共同作用的。 DNA发生甲基化后，甲基化结合蛋自与甲基化的胞嘧啶结合，随厉招募组蛋白 去乙酰基化酶、甲基化转移酶等形成抑制性复合体重塑染色质结构，抑制基因的 表达。表观遗传学的研究材料包括组织标本、休液标本和肿瘤的细胞株等；其研 究内容包括甲基化失表达与肿瘤l临床病理特征之问的关系、与肿瘤发生、发展、 预后及其复发等的相关性，同时也研究甲基化的模式、密度和失表达的机制等。 表达在血细胞中，参与淋巴免疫细胞的信号传道，调节细胞的增生、增殖和分化。 它的功能和活性在细胞内受到严格的调控，其功能的丧失将会导致机体免疫力的 下降，从而促进正常细胞的恶性变。Coopman等人首次报道了Syk在正常乳腺 上皮中高表达，在原位癌中低表达，在浸润性导管癌中不表达，其表达状态与乳 腺癌淋巴结转移呈负相关。多个报道提示syk在多种上皮细胞中表达，但是关于 其失表达状态机制的研究较少，Yuan等的研究表明在乳腺癌中，Syk的失表达 与其启动子CpG岛甲基化关系密切，甲基化可能是其失活的主要机制或者是唯 一机制。Syk在结直肠癌细胞株表达，且其表