中国特有植物羊踯躅遗传多样性ISSR分析.pdfVIP

摘要 从5个天然居群(金溪、庐山、井冈山、武宁和瑞昌)采集羊踯躅样品，用 改良的2×CTAB法从样品叶片中提取基因组DNA，优化了PCR循环参数，建立了 ISSR—PCR扩增的最佳反应体系，从167条随机引物中筛选出多态性好且清晰度 高的引物，并用筛选出的引物对39个羊踯躅个体的基因组DNA进行扩增，对羊 踯躅居群的遗传多样性和遗传结构进行了研究。 实验结果表明用丙酮对样品进行预处理可以提高产物的纯度。ISSR—PCR扩 u 增条件经过优化后确定为在25l的ISSRPCR反应体系中，各项因子最适条件 u 为：模板DNA30～45ng／25 1-t buffer2．5u 物0．3～O．4mol／1，Taq酶O．5～1．OU：10×PCRl，加ddHz0至 25u ℃30s，72。C2mi r1)，最后72℃延伸7min后在4℃终止反应。 本研究对167条ISSR引物进行了筛选，筛选出多态性好且清晰度高的13条 引物用于5个居群39个样本的扩增。结果共检测到196个位点，其中190个为 多态性位点，多态性位点百分率(PPB)为96．94％。 根据不同个体的扩增图谱构建了0、1矩阵输入计算机。数据处理结果如下： 和0．5320)。由UPGMtA聚类分析可知金溪、庐山、井冈山和武宁四个居群聚为一一 支，瑞昌居群单独作为一支。由Mante]相关性检测可知，居群的遗传距离与地 理距离有一定的相关性，但并不显著。 通过对羊踯躅遗传多样性和遗传结构的研究，提出了保护羊踯躅遗传多样性 的策略：1．实施就地保护和迁地保护策略；2．建议在居群间进行植株和幼苗移 栽，以提高居群间的基因交流，以最大限度保护羊踯躅自寸遗传多样性；3．保护和 重建羊踯躅居群的适宜环境。 关键词：羊踯躅；ISSR分子标记；遗传多样性；遗传结构；保护策略 Abstract 2xCTAB The methodwasusedto extractDNA improved from RhododendronmolleG．Don whichwel-e fromJinxi、Lushan plant-leaves gathered and Mountain、JinggangshanMountain、Wuning Richang．Therecyclingparameters were and reaction suitablefor optimizedoptimal system ISSR-PCR was amplification establishedinthe that carl and primers paper．The producepolymorphic，clear brJi曲t bandshavebeen∞lectedforISSR Oil39 in amplification