杂交三倍体泥鳅细胞遗传学与研究.pdfVIP

Study on cytogenetic in hybrid triploid loach Misgurnus anguillicaudatus By Gao Yangchun A Master’s Degree of Animal Genetic Breeding and Reproduction Supervisor: Professor Li YaJuan June, 2014 摘要 摘要 泥鳅(Misgrunus anguillicaudatus)是我国常见的一种小型经济鱼类，因其具有较高的营养价值而受到 消费者的喜爱，但由于泥鳅所栖息自然环境的破坏及人为的过度捕捞，野生泥鳅的产量及品质逐年下降， 已难以满足市场的需求。因此，泥鳅良种选育及对其细胞遗传研究就显得十分重要。泥鳅存在多倍体现 象，三倍体鱼类因其育性差、生长快等特性而成为鱼类育种研究的热点，对三倍体泥鳅的研究多集中在 体细胞方面的研究，而对与其育性相关的生殖细胞的研究，尤其是染色体行为及带型方面的研究尚未见 报道。本研究利用二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅杂交所获得的杂交三倍体泥鳅为研究对象，通过制备其 生殖细胞减数分裂染色体来研究减数分裂过程中染色体的行为特征，并利用 Ag-NORs 、 CMA /DA/DAPI 、荧光原位杂交(FISH)技术探讨生殖细胞染色体的带型特征，最后利用C 带技术研究了 3 二倍体及杂交三倍体泥鳅胚胎染色体的带型特征，所获得的研究结果如下： 1、无论四倍体泥鳅与二倍体泥鳅正交还是反交后代生殖细胞染色体减数分裂中不但发现有单价体 及二价体的存在，也发现了不同配对形式的三价体；而且也发现了染色体加倍现象；正反交的精母细胞 中均包括超二倍体细胞至亚三倍体细胞（23.3% ，17.2%），三倍体细胞（26.0% ，50.9% ），超三倍体 细胞至亚四倍体细胞（37.6%，26.4% ），除此之外也包括少量的四倍体细胞至超超六倍体细胞（3%， 5.5% ）；它们的卵母细胞中也均包括部分亚三倍体细胞（12%，5.9%），整三倍体细胞（80%，86.3%）， 及少量的超三倍体细胞至亚四倍体细胞（8%，7.8% ）。 2 、在杂交三倍体后代精母细胞减数分裂MI 期染色体上的银染点的数目具有多态性，既有两个银 染点的，位于一个二价体的两端或者一个二价体及一个单价体的一端，也有三个银染点的，分别位于一 个二价体的两端及一个单价体的一端，强度是一强两弱，还有只有一个明显银染点的，位于一个二价体 的一端，另一端无银染点；CMA /DA/DAPI 结果显示杂交三倍体泥鳅的减数分裂染色体上具有两个 3 CMA3 阳性部位，有的位于一个二价体的一端，一个单价体的一端，有的位于一个二价体的两端，但在 单价体上缺少一个 CMA3 阳性部位；FISH 结果显示有的精母细胞中存在两个FISH 信号，分别位于一 个二价体及一个单价体的一端，但有的存在三个FISH 信号，并位于三个不同的单价体上。 3、二倍体泥鳅及杂交三倍体泥鳅胚胎染色体C 带结果显示：二倍体泥鳅核型公式为2n = 50 = 10M + 4SM + 36T ，三倍体的核型公式为3n = 75 = 15M + 6SM + 54T ，二倍体及杂交三倍体泥鳅均只具有臂 端C 带及着丝粒C 带，没有发现臂间C 带，无论是二倍体还是杂交三倍体的臂端C 带均为位于M1 短 I 摘要 臂端部，而且臂端C 带均比着丝粒C 带大，信号也比着丝粒位置上的强；并且二倍体有两对臂端C 带， 三倍体有三对臂端C 带。 关键词：三倍体泥鳅；Ag-NORs ；CMA /DA/DAPI ；FISH ；C 带 3