PCR(聚合酶链反应).pptVIP

PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR的基本原理 PCR中的注意事项 PCR的反应特点 PCR技术的应用 琼脂糖凝胶电泳操作技术 RT-PCR技术 2.Taq DNA聚合酶 1988年R·K·Saiki等人从嗜热细菌Thermns aquaticus中分离 的Taq DNA聚合酶,此酶对热稳定,95℃时仍不变性， Mg2+依赖 性、无校读功能. 注：酶的质量和浓度直接影响扩增带的强弱,如果酶的浓度过低PCR产物过少难以检测，而酶的浓度高又使试验的成本增加 3.模板 DNA：从细胞中提取DNA：血细胞、绒毛、尿样、毛发、精斑、固定和包埋的组织标本：脱蜡、蛋白酶K消化 RNA：新鲜组织或细胞，所用器皿和试剂必需经高温灭菌或DEPC处理。 注：常规的PCR中,对模板的要求并不严格.但对一些特殊的PCR如扩增大片断DNA的PCR,模板的浓度直接影响扩增的重复性,特异性和扩增的产量. 4. dNTP、模板和Mg2+ dNTP的浓度对PCR的扩增产物也有很大的影响:如在RAPD反应中如将0.1mol/L的dNTP提高到0.4 mmol/L,扩增的效果差,谱带弱,甚至无谱带. 主要原因:是dNTP同Taq酶竞争Mg2+,从而使Taq酶的作物不能充分发挥.所以dNTP作为反应原料并不是越过量越好,而是有一定范围. Mg2+是Taq酶