凋亡诱导因子(AIF)凋亡通路介导顺铂肾毒性损伤及研究.pdf

中文摘要 AIF凋亡通路介导顺铂肾毒性损伤的研究 中文摘要 前言 顺铂(cisplatin，CP)，即顺式一二氨二氯合铂，是最有效的肿瘤化疗药物之一， 已在临床应用30多年，其抗癌谱广，目前已被广泛应用于治疗睾丸癌、卵巢癌、膀 胱癌、头颈部肿瘤、宫颈癌、小细胞及非小细胞肺癌等。然而，由于该药对肾脏可发 生累积性毒性损伤作用，在接受大剂量CP治疗的肿瘤病人中，约1／5病例可发生急 性肾功能衰竭的严重后果，因此其临床应用受到极大的限制。CP的肾毒性作用机制 复杂多样，细胞凋亡始终是极为重要的机制之一，过去对凋亡机制的研究主要集中在 天冬氨酰酶(easpases)依赖途径。 factor，AIF)是一种位于线粒体内膜的黄素蛋 凋亡诱导因子(apoptosis．inducing 白。在某些促凋亡信号刺激下，AIF经蛋白水解剪切从线粒体内膜上脱落经开放的线 transition 粒体通透性转换孔道(mitochondrial permeabilitypore，MPTP)被释放，继 而发生细胞核转位。AIF在核内可直接引起纯化的细胞核染色质聚集和DNA片断化， 此过程及相关机制尚有争议，并无统一而明确的说法。研究表明A]F上游的重要调节 是一种具有促进细胞损伤修复和增加细胞凋亡双重作用的核内蛋白。当某些严重损伤 如3-AB则能抑制AIF核转位。但是关于该调节机制在CP肾毒性机制中的作用，尤 其是体内研究仍较缺乏。 本课题通对体外(CP作用于肾小管上皮细胞株HK．2)及体内(CP大鼠肾损伤 模型)实验，观察CP对HK-2细胞致坏死和凋亡作用，以及对胞质胞核AIF蛋白、 凋亡率影响；运用3-AB进一步研究AIF介导的凋亡通路的调节因子与可能机制，从 2 中文摘要 而为进一步防治CP肾毒性损伤的临床实践提供新的理论和实验基础。 第—部分顺铂(cP)对HK-2细胞的毒性作用 目的观察顺铂(CP)对H_K-2细胞的毒性作用 u 方法不同浓度(0200 盼蓝染色检测细胞活度，流式细胞仪检测细胞坏死与凋亡情况。WesternBlot检测不 护剂氨磷汀对CP作用下HK．2细胞的影响。 结果CP导致HK-2细胞活度降低，与剂量和时间呈显著性相关。细胞凋亡率 p 11M(CP作用24hr) 呈一定剂量(O～100M)和时间(0-～24hr)依赖性，分别在100 和24hr(50uMCP)时达高峰，分别为对照组的5．2倍和5．0倍。CP作用能激活细 作用。 小结CP对HK02细胞毒性作用具有明显的时间和剂量依赖性；较高浓度CP 作用，细胞以直接坏死为主要表现，而较低浓度CP作用，细胞则以凋亡为主；CP 细胞损伤，对细胞具有保护作用。 第二部分AIF通路介导CP诱导HK-2细胞凋亡的研究 目的研究AIF是否介导CP诱导HK．2细胞凋亡 及AIF 3 中文摘要 细胞凋亡的抑制作用。 mRNA表达在CP浓 表达与PARP剪切片断(cleaved．P_6岫)表达趋势基本一致。AIF 亡抑制率分别为60．1％和39．2％，两者联合应用对其抑制作用更明