高静水压刺激对血小板活化影响及PPARγ的保护作用研究.pdf

0 j：0 删删㈣㈣ Y1 814§岑芗 摘要 摘要 研究背景和总体思路 已经明确高血压痛患者血小板聚集性和粘附性均明显亢进。由于相关研究 多集中于临床观察，但高血压病患者常合并多种异常情况，除血压外，其他并 存的因素也参与血小板激活。因此血压本身对血小板激活的作用及其程度尚不 明确。为此，我们在离体孵育的条件下，观察静水压对血小板的影响。 最近研究发现，血小板不仅能合成蛋白质，还通过剪切预存于多聚核糖体 中的未成熟的RNA为成熟的mRNA，翻译mRNA合成蛋白质。当血小板激活 时起动了细胞内的信号转导反应，导致特异性的RNA被翻译并产生蛋白质。由 于血小板源于巨核细胞，巨核细胞的mRNA也能直接影响血小板激活后的功能。 我们设定，高血压病患者的血小板的异常变化，部分可能是巨核细胞变化的继 发变化。目前，高血压对外周循环巨核细胞是否影响，是否会进而影响血小板 的状态及功能，尚未见研究报道。 ProliferatorActivated 证实血小板的PPARy具有活性，能抑制血小板的激活。对于高血压病患者血小 板PPAR7的变化，尤其是PPAR?的信号转导途径，值得深入研究。 基于上述未决问题，本课题利用自制的高静水压装置，在体外利用不同的 压力条件孵育血小板及巨核细胞，进行以下几方面的研究：高静水压对血小板 的形态和结构及功能的影响、高静水压对巨核细胞的形态和结构及功能的影响 和PPAR7在高静水压刺激血小板中信号传导作用。通过上述研究，以加深高血 压对血小板激活认识，为临床更有效地防治高血压靶器官损害提供有价值的实 验依据。 第一部份高静水压对血小板的形态和结构及功能的影响 目的： 利用体外静水压孵育血小板的模型，观察不同压力，以及同一压力不同时 间对血小板的形态、结构及功能的影响。 II 摘要 方法： 小板18小时，观察以下指标。1、在电镜下观察血小板超微结构的变化，全自 动血细胞分析仪测定血小板形态参数，全自动生化分析仪测定血小板孵育液中 LDH；2、测定血小板聚集率和流式细胞仪测定血小板活化表面标志物PAC．1和 和Caspase3的蛋白表达；4、血小板PPAR),活性的测定。 结果： l、血小板超微结构：正常大气压孵育血小板18小时，血小板细胞呈静止 状态，细胞规整、表面突触少、致密颗粒多；高静水压刺激后，细胞形态大小 不一，血小板羽状突起增多。细胞内致密颗粒减少，血小板呈活化状态，个别 细胞出现消解、崩溃的图形。 2、血小板的参数：正常大气压孵育血小板不同时段的血小板的参数无明显 著减少，18小时血小板分布宽度(PDW)的显著增加。不同的静水压处理血小 和240mmHg引起血小板MPV、PDW的显著减少。 3、LDH的变化：正常大气压孵育各时段的上清中的LDH无统计学差异， 而180mmHg处理组，随时间延长，LDH浓度逐渐增加，18小时段明显高于其 他时段。不同静水压处理组，240mmHg、180mmHg处理组均明显高于对照组。 4、血小板聚集率：180mmHg刺激l小时后最大聚集率即明显增加，6小时 和18小时的2min、4rain和最大聚集率均有极显著的增加。 大聚集率均比对照组显著增加，1 统计学意义。 5、血小板PAC．1：三个高静水压处理组血小板的PAC．1均显著增加；在 180mmHg处理1小时血小板激活有增加但不显著，在6小时和18小时相较O 小时和1小时均可检测到显著的血小板激活。 III 摘要 6、P．selectin蛋白表达：不同静水压的比较表明，随着静水压的增加， P-selectin表达逐渐增加。1 120mmHg组。 表达随着静水压的增加而明显增加。 8、血小板内PPART的蛋白量：不同