携带IKK2dn基因重组腺病毒载体构建及表达验证.pdf

携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体的构建及表达验证 中文摘要 携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体的构建及表达验证 中文摘要 装成腺病毒颗粒，并进一步转染哺乳细胞hela并验证其在细胞中表达，为进一步研 究转IKK2dn基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受，保护移植物的作用奠定基础。 态细胞DH5a，丁胺卡那霉素筛选。提取单克隆菌落，作酶切鉴定，抽取阳性菌落即 双酶切处理，回收和纯化。T4DNA连接酶进行连接后转化为感受态细胞DH5a，氨 苄青霉素筛选。提取单克隆菌落，作酶切鉴定，抽取阳性菌落即得到 胞。观察细胞出毒迹象并进行包装，收毒，冻融，扩增，再收毒并作毒种鉴定后以离心， 透析方法纯化腺病毒进行滴度测定及检测。(4)并将腺病毒颗粒转染哺乳细胞hela并 验证其在细胞中表达。 为2x1011 实验研究需要。 腺病毒颗粒成功转染哺乳细胞hela，为进一步研究转IKK2dn基因在同种异体器官移 植中诱导免疫耐受，保护移植物提供了理论和实验基础。 IKK2dn 关键词 基因转移 腺病毒载体 293T细胞