《MTS_promega_说明书》.pdfVIP

普洛麦格(北京)生物技术有限公司 地址: 北京市东城区北三环东路36 号环 球贸易中心B 座907-909 电话: 010 传真: 010 网址: 普洛麦格(北京)生物技术有限公司 CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 此中文说明书可以从以下网址/ctbs/ 请登陆以上网页查看您是否使用的是最新版的说明书。如果您在使用这个系统时有任何问题，请与 Promega 技术支持联系。邮件:chinatech@ I. 描述………………………………………………………………………………………….………………….1 II. 产品组分和保存条件………………………………………………………………….………………………4 III. 操作步骤………………………………………………………………………………………………………5 A. 一般操作步骤………………………………………………………………………………………………….5 B. 应用举例：用B9细胞检测IL-6生物活性的操作程序……………………………………………………….5 IV. 通常需考虑的因素……………………………………………………………………………………………6 A. 背景吸光度值………………………………………………………………………………………………….6 B. 读取数据的可选波长………………………………………………………………………………………….6 C. 淋巴细胞检测………………………………………………………………………………………………….7 D. 试剂优化……………………………………………………………………………………………………….7 E. 细胞数的优化………………………………………………………………………………………………….7 V. 相关产品……………………………………………………………………………………………………….8 VI. 参考文献…………………………………………………………………………………………………….11 I. 描述 CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay(a)是一种用比色法来检测细胞增殖和细胞 毒实验中的活细胞数量的检测试剂。此试剂含有一个新型的四唑化合物 [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt; MTS(a)] 和一种电子偶联剂(phenazine ethosulfate ; PES)。PES具有增强的化学稳定性，这使它可与MTS混合形成稳 ® 定的溶液。这种方便的“单溶液”模式，是在第一代CellTiter 96 AQueous Assay 的基础上的改进，CellTiter 96®AQueous Assay 中使用的电子偶联剂PMS与MTS溶液是分开提供的。 MTS (Owen’s reagent) 被细胞生物还原成为一种有色的甲臜产物，可直接溶解于培养基中(图1, 1)。 这种转化很可能是在代谢活跃的细胞中的脱氢酶产生的NADPH或NADH的作用下完成的(2)。检测时，只 需将少量的CellTiter 96® AQueous One Solution Reagent 直接加入培养板孔的培养基中，孵育1–4小时， 普洛麦格(北京)生物技术有限公司 然后以酶标仪读取490nm 的吸光度值(3,4)。 1 图1. MTS四唑盐和其甲臜产物的结构。 在490nm处检测到的甲臜产物的量与培养中的活细胞数成正比(图2) 。由于MTS的甲臜产物在组织培养 基中可溶，CellTiter 96® AQueous One Solution Assay与MTT或INT法相比操作步骤更少(5,6)。MTT还原 反应的甲臜产物是一种结晶沉淀，在检测（570nm ）前需要额外的步骤来溶解这种结晶(7)。 如果您目前在使用[3H]胸腺嘧啶掺入法，那么可以在通常需