FK506对高糖培养大鼠视网膜Müller细胞生物学特性的影响.pdf

FK506 对高糖培养大鼠视网膜Müller 细胞生物学特性的影响 中文摘要 FK506 对高糖培养大鼠视网膜Müller 细胞 生物学特性的影响 中文摘要 第一部分 视网膜Müller细胞的培养及FK506 半数抑制率研究 目的: 培养、鉴定视网膜Müller 细胞，检测FK506 对视网膜Müller 细胞的IC50 ， 为FK506 对Müller 细胞的生物学作用研究提供实验基础。 方法: 采用含 10%胎牛血清的DMEM 培养基(含D-葡萄糖 5.5mmol/L)，培养大 鼠永生化视网膜Müller 细胞。Müller 细胞培养12、24 、48h 倒置显微镜下观察Müller 细胞形态并照相记录。以谷氨酰胺合成酶 (GS)免疫细胞化学染色鉴定。MTT 法检测 FK506 作用于视网膜Müller 细胞的生长抑制率。 结果: 光镜观察见Müller 细胞呈典型的多角形，细胞大小均匀，细胞边界清晰， 形态无明显差异。Müller 细胞GS 抗体免疫细胞化学染色(+) ，细胞质中和细胞膜上出 现棕黄色、棕褐色颗粒状或者网状物质。MTT 法检测 Müller 细胞的生长抑制率， FK506 IC50=75pg/ml 。 结论: Müller 细胞生长良好，FK506 的IC50=75pg/ml 。 关键词: Müller 细胞， FK506 ，生长抑制率 第二部分 FK506 对高糖培养视网膜Müller细胞VEGF 表达的影响 目的: 采用FK506 干预大鼠视网膜Müller 细胞，观察其对Müller 细胞VEGF 基 因表达的影响，从而探讨FK506 对高糖培养的视网膜Müller 细胞中VEGF 基因表达 的调控作用。 方法: 采用常规 DMEM 培养基(D-葡萄糖浓度 5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄 糖浓度50mmol/L) 。分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506 组(D-葡萄 I 中文摘要 FK506 对高糖培养大鼠视网膜Müller 细胞生物学特性的影响 糖浓度5.5mmol/L +FK506 75pg/ml ）, 高糖组(D-葡萄糖浓度50mmol/L)，高糖+FK506 组（D-葡萄糖浓度50mmol/L+FK506 75pg/ml ）。ELISA 检测FK506 对常规和高糖培 养条件下的大鼠视网膜Müller 细胞上清中VEGF 的表达。RT-PCR 检测Müller 细胞 中VEGF 基因的表达。 结果: ELISA 检测各组Müller 细胞中VEGF 浓度：结果表明高糖组比正常对照组 细胞上清中 VEGF 的表达浓度升高 （P0.05 ）。在高糖+FK506 组较单纯高糖组细胞 上清中VEGF 的表达浓度降低（P0.05 ）。 RT-PCR 检测各组的光密度值：高糖组较正常对照组的视网膜Müller 细胞VEGF 基因mRNA 的表达增高（P0.05 ）；高糖+FK506 组较高糖组VEGF 基因mRNA 的表 达降低（P0.05 ）。 结论: FK506 可抑制高糖培养的视网膜Müller 细胞VEGF 的表达。 关键词: FK506 ，视网膜Müller 细胞，VEGF, 高糖 II FK506 对高糖培养大鼠视网膜Müller 细胞生物学特性的影响 中文摘要 第三部分 FK506 对高糖培养视网膜Müller细胞凋亡的影响 目的: 观察FK506 对高糖培养视网膜Müller 细胞凋亡的影响。 方法: 采用常规 DMEM 培养基(D-葡萄糖浓度 5.5mmol/L)，配制高糖组(D-葡萄 糖浓度50mmol/L) 。实验分组：正常对照组(D-葡萄糖浓度5.5mmol/L)，FK506 组(D- 葡萄糖