对虾白斑综合症病毒受体阻断剂的初步筛选.pdf

对虾白斑综合症病毒受体阻断剂的初步筛选 摘要 Virus，WSSv)自92年以来养殖一 对虾白斑综合症病毒(WhitespotSyndrome 类宿主广且毒力强的对虾病原，给海水养殖业带巨大的经济损失。十几年来，各 研究者从其组织病理学、免疫学、基因组学及蛋白质组学等深入分子生物学水平 的研究，对该病原有了很深了解。然而有关其抗病毒药物的研究至今未见有报道， 本论文建立了96孔板上建立了对虾鲴膜受体蛋白和wssV的特异结合模型， 研究了二者结合的量比关系，及包被蛋白的最适量；还研究了TxitionX一100、SDS 活性，而SDS则会使结合活性降低。通过本研究，改进了96孔板上病毒和鳃膜 受体蛋白特异结合的技术。 研究了一些多糖对WSSV受体的阻断作用，筛选得到的三种多糖对WSSV 的受体结合有很强的抑制作用。包被对虾鳃膜受体蛋白，使受体结合与固相载体 上，然后加入多糖H处理过的地高辛标记的WSSV，实验结果发现，多糖H处理 过的WSSV结合活性有很明显的降低；把WSSV包被于固相载体上，加入分别用 多糖A及多糖P处理过的地高辛标记的对虾鳃膜受体蛋白，结果显示，二者对鳃 膜受体蛋白结合活性也有很明显的抑制作用。进行了多糖H对健康虾的抑制感染 研究，结果表明多糖H对WSSV的感染有一定程度的抑制作用。揭示了多糖抗 WSSV感染的可行性。 通过毕赤酵母表达系统成功表达了wSsv的两个粘附蛋白VP28l及VP292， 96孔板上分析其结合活性，结果显示VP281有很强的结合活性，提示了酵母表达 析柱得到纯化样品对WSSV的受体阻断作用，发现都有很强的抑制效果，进一步 的一个关键性粘附蛋白，同时也揭示了抗病毒策略的另一条途径是酵母表达产物 的应用。 关键词：WSSV；病毒受体；病毒吸附蛋白；阻断剂；多糖；酵母表达产物 of inhibitor Primary toWSSV screeningreceptor Abstract Inthis WSSV cell and memberanewere study particlesgill proteinpurified theWSSVon well thell coated 96 e虢ct耐thmembarane respectively．we plate protein labledwith orcoatedthe onthe memberane thenboundwith D1G prateinplate WSSV resuitWaSdetected Anti—DIG—Fab{珏iP color particles；thebinding by system．The theindex showaS the ofthetwo change ofbindingactivity．A1SOquantities composition were onthe studiedtheeffcct TxitionX一100，SDSand