番茄黄花曲叶病毒和其它几种病毒复合侵染的研究.pdfVIP

JIIIIIJlllI Illll IIII IIIIl 资助 目录 中文摘要………………………………………………………………………………．．【 Abstract…………………………………………………………………………………………………………II 1前言…………………………………………………………………………………】 1．1番茄………………………………………………………………………………．】 1．1．1番茄病毒病的主要毒源种类…………………………………………………．．】 1．1．2番茄病毒病的症状及类型……………………………………………………．．2 1．1．2．1番茄黄化曲叶病毒……………………………………………………………．2 1．1．2．2黄瓜花叶病毒…………………………………………………………………4 1．1．2．3烟草花叶病毒…………………………………………………………………6 1．1．3实时荧光定量PCR技术………………………………………………………7 1．1．3．1荧光定量PCR的原理………………………………………………………．7 1．1．3．2荧光定量PCR的特点………………………………………………………．{： 1．1．3．3荧光定量PCR的数据分析…………………………………………………．9 1．1．3．4荧光定量PCR的应用………………………………………………………．9 1．1．4病毒的互作……………………………………………………………………1(I 1．1．4．1协生作用……………………………………………………………………．10 1．1．4．2干扰作用……………………………………………………………………．1】 1．3研究目的意义与内容……………………………………………………………．1】 1．3．1研究的目的与意义……………………………………………………………12 2材料与方法………………………………………………………………………．．13 2．1材料………………………………………………………………………………………………………一13 2．1．1番茄黄化曲叶病毒复合侵染样品采集及检测………………………………13 2．1．2供试植株………………………………………………………………………1=； 2．1．3菌株和载体……………………………………………………………………13 2．1．4生化及分子生物学试剂………………………………………………………1=； 2．1．5主要实验仪器…………………………………………………………………1=； 2．1．6实验所需试剂及配制…………………………………………………………14 2．2方法………………………………………………………………………………………………………．．15 2．2．1总DNA的提取………………………………………………………………．．15 2．2．2 DNA的纯化……………………………………………………………………16 2．2．3 DNA纯度检测…………………………………………………………………l6 2．2．4引物设计合成…………………………………………………………………l7 2．2．5 PCR产物的克隆及测序………………………………………………………18 2．2．5．1琼脂糖凝胶电泳………………………………………………………………18 2．2．5．2 PCR产物回收………………………………………………………………．18 2．2．5．3连接反应……………………………………………………………………．．19 2．2．5．4大肠杆菌感受态细胞的制备………………………………………………．19 2．2．5．5连接产物转化大肠杆菌……………………………………………………．20 2．2．5．6碱裂解法提取质粒DNA……………………………………………………21 2．2．5．7重组质粒鉴定………………………………………………………………．2l 2．2．5．8序列分析……………………………………………………………………．22 2．3基因组总RNA的提取…………………………………………………………．22 2．3．2引物设计合成…………………………………………………………………22 2．3．3聚合酶链式反应(PCR扩增)………………………………………………26