急性运动对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖能力与不同pH值对骨骼肌细胞胞浆Ca2%2b+代谢的影响.pdf

急性运动对大鼠骨骼肌卫星细胞增殖能力 2+ 和不同pH值对骨骼肌细胞胞浆Ca代谢的影响 导 师 田 野 教授 博士研究生 周锦琳 摘要 2+ 目前 有关钙信号转导对细胞机能影响方面的研究十分活跃 Ca作为一种胞内信 使 它与受体结合 能引起细胞发生各种反应 大量的研究表明 运动引起肌浆网和线粒 2+ 2+ 体转运 Ca能力下降 胞浆 Ca聚积是骨骼肌疲劳的重要原因 但是有关运动后胞浆钙聚 2+ 积的直接证据尚未见到报道 本论文从研究不同 pH值时胞浆 Ca的变化入手 连续观察 2+ 力图从细胞水平系统地分析急性运动对骨骼肌胞浆钙稳态的 一段时间内胞浆 Ca的变化 影响 为全面了解运动性疲劳的产生机制 更科学地进行运动训练提供理论依据 结果发现 1 急性大强度运动后 血乳酸明显增多(P0.01)运动后 48小时 血 乳酸值仍未恢复 中等强度运动后 血乳酸变化不明显 这表明大强度运动后 机体内环 境长时间受到酸性作用的影响 2 急性大强度运动后血清总钙和游离钙都下降 但还无法确定血钙的变化是由于 血乳酸的变化直接造成的 有可能是血乳酸的变化间接引起血钙变化 血清总钙和游离钙 在大强度运动后24小时下降到最低值(P0.01)在运动后 48小时 虽仍明显低于正常安 静值(P0.01)但已经开始恢复 这二项指标的变化与运动后线粒体钙的变化时相一致 这可能提示 大强度运动后血钙的下降与骨骼肌细胞线粒体钙增加有关 3 培养骨骼肌细胞时采用分离培养法 消化酶为0.25%的胰酶 消化后用 150目滤 网过滤 离心速度为 8001000rpm培养基为含 10%胎牛血清的 DMEM溶液 预贴壁时间 为 2小时或更长时间 Desmin免疫组化方法证明上述方法能获得实验所要求的骨骼肌细 胞 4 不同年龄大鼠骨骼肌干细胞的增殖能力不同 年龄越大 骨骼肌干细胞的增殖 能力越差 急性运动能增强骨骼肌卫星细胞增殖能力 大强度运动后骨骼肌卫星细胞的增 殖能力强于中等强度运动 2+ 5 骨骼肌细胞处于正常安静状态时 胞浆 Ca水平在一定的基线上波动 形成了 2+ 近似于正弦波形的钙波 骨骼肌细胞处于酸性环境中时 胞浆 Ca水平的总体变化趋势是 先略有增强后迅速减弱 直至在比正常低的水平上形成新的动态平衡 钙波的变化既有振 + 幅的变化 也有频率的变化 这可能与胞浆内H浓度升高有关 I 2+ 6 骨骼肌细胞在酸性环境中未发生明显的胞浆 Ca聚积现象 这可能与体外模拟 刺激与急性运动的实际刺激形式不同有关 还可能与体外刺激的程度较低 pH=6.9刺 激的时间较短 细胞的自身状态较好有关 7 急性运动后大鼠骨骼肌卫星细胞增殖能力增强 这可能从侧面说明了急性大强 度和中等强度长时间运动造成了骨骼肌细胞损伤 从而刺激卫星细胞的增殖分化 促进了 骨骼肌细胞的再生和修复 是否是胞浆钙变化引起肌细胞损伤这还有待于进一步研究 2+ 8 骨骼肌处于碱性环境中 胞浆 Ca水平的总体变化趋势是先增强后恢复 直至