羊水入血后大鼠肺组织NF-kB、MPO的表达及其地塞米松治疗作用的实验的研究.pdfVIP

中文摘要 前 言 羊水栓塞(AFE)是一种发病率低但又不可预料且死亡率极高的最严 重的产科并发症，并能在极短时间内发展为多器官功能障碍综合征 (MODS)。由于AFE发病急促、病程进展迅速、死亡率极高，给疾病的发病 机理研究、预防、诊断和治疗带来困难。髓过氧化物酶(MPO)存在于中性 粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中，PMN激活时部分MPO可以释放。可作为 中性粒细胞的标志物，敏感地反映出组织中性粒细胞浸润的程度。核因子 一kB(NF—kB)是一种能与多种细胞因子基因启动子和增强子中的KB序 列位点发生特异结合的核转录因子，具有广泛的生物学活性。受感染、创 伤、氧化应激、内毒素(LPS)、细胞因子等多种刺激活化后发：生核易位，在细 胞核内能促进细胞因子、黏附分子、趋化因子等基因转录，可能与AFE所致 多器官功能障碍综合征(MODS)的发生、发展有着密切的关系。地塞米松 (Dex)具有抗炎、抗过敏作用，可以缓解炎症进程。本实验旨在通过妊娠晚 期大鼠输入不同性质自体羊水，制造羊水入血模型，探讨核因子一kB(NF— kB)及髓过氧化物酶(MPo)在羊水入血造成肺损伤的机制及地塞米松的干 预作用。 实验材料与方法 一、买验材料 国医科大学第二临床学院实验动物中心)。精选满足实验要求者。随机分 为对照组(生理盐水)、羊水组、治疗组A(羊水+Dex)、胎粪组、治疗组B (胎粪+Dex)。 2．实验试剂及设备： (1)试剂：兔抗鼠NF—kB p65抗体，MPO试剂盒。 PoN卜 (2)设备：血压监测仪(Siemens)，低温超速离心机(美国DU SORVALL POWERPAC SUPER—T21型)，电泳仪(BIO—RAD 300)，电泳槽 (DYY一11I 析系统。 二、实验方法： 1．制备实验用羊水及l％浓度胎粪液。 2．制作大鼠羊水入血模型。经颈动脉插管监测血压。由颈静脉注入不 (0．1mg／1009)。60rain后处死动物，取材。 3．提取肺组织核蛋白。 4．免疫蛋白印迹法(Western—blot)分析NF—KBp65蛋白表达：用数 码图像分析系统进行扫描分析，结果用测得目标带的密度表示。 (A)值。MPO活性(u／g湿组织)=AA 条件下30 活性是减少1¨mol过氧化物／min所需酶量)。 6．HE染色，光镜下观察肺组织病理改变。 7．免疫组化检测NF—kB p65蛋白表达：采用半定量i汁数方法对每个 切片的10个视野在400倍率显微镜下计算p65阳性细胞百分数。 8．统计学分析：精选动物在实验中全部存活，满足本实验要求(实验前 SPSS统计软件在微机上进行。所有检测结果用均数±标准差(i±s)表示， 异。 实验结果 1．病理学检查：实验组肺组织不同程度水肿，血管丰富，局部可见少量 出血，血管及支气管周围可见大量炎性细胞浸润，包括白细胞(主要为中性 粒细胞)、巨噬细胞及少量淋巴细胞。对照组未见明显病理改变。 低，与干预前相比具有显著性差异(P0．05)，如表l所示。 ·2· 3．免疫组化结果：对照组阳性细胞极少；羊水组、胎粪组肺组织内存在 大量阳性细胞，差异显著(P0．01)；治疗组阳性细胞均少：于治疗前，有明 显差异(P0．05)。 讨 论 天青颗粒中，PMN激活时部分MPO可以释放，因此MPO可作为中性粒细 胞的标志物，敏感地反映出组织中性粒细胞浸润的程度。本研究中除对照 组外，其余各实验组病理切片中，肺组织不同程度水肿，血管丰富，肺实质局 部可见少量出血，血管